Inibição da expressão gênica de MMP-13 e p38 MAPK por meio de shRNA carreado por vetor de adenovirus em um modelo de doença periodontal experimental em roedor

Resumo

A doença periodontal inflamatória é caracterizada por extensa destruição de tecido conjuntivo mineralizados e não-mineralizados. Está associada a aumento na expressão de diversos genes pró-inflamatórios e também de MMP-13, num quadro similar ao observado na artrite reumatóide. A regulação da expressão de MMP-13 é complexa, mas envolve p38 MAPK, a qual faz parte de uma via de sinalização importante para muitos genes pró-inflamatórios. A inibição de MMP-13 e p38 MAPK tem sido ativamente estudada como uma abordagem terapêutica para diversas condições inflamatórias, incluindo câncer, doenças hepáticas, artrite reumatóide e doença periodontal, contudo o uso de moléculas pequenas como inibidores bioquímicos tem efeitos colaterais sistêmicos potencialmente deletérios. Este projeto propõe a utilização de uma abordagem da terapia gênica para inibição seletiva da MMP-13 e p38 MAPK, através da shRNA carreado por vetor de adenovirus. Esta abordagem permite uma inibição altamente seletiva, localizada e transitória dos genes-alvo, o que pode minimizar os possíveis efeitos colaterais associados à administração sistêmica de compostos inibidorres ou ao uso de outros tipos de vetores virais que podem se integrar ao genoma do hospedeiro. Será utilizado em modelo de doença experimental induzida em roedor e a inibição de MMP-13 e p38 MAPK será obtida com a injeção dos tecidos gengivais afetados de vetores de adenovirus codificando a expressão de shRNA para estes genes. Os controles serão representados pela injeção do mesmo vetor viral vazio ou com um gene-reporter (beta-galactosidase). O efeito sobre a destruição óssea será avaliado por histologia e micro-tomografia computadorizada. Além disso, os efeitos da inibição de MMP-13 e p38 MAPK sobre a expressão de genes pró-inflamatórios in vivo será avaliada nos níveis de RNAm e proteína por RT-PCR em tempo real, Western blot e ELISA. (AU)