Processamento das metaloproteinases do veneno botrópico: ativação da atividade catalítica pela remoção do pró-domínio

Resumo

As metaloproteinases (SVMPs - Snake Venom MetalloProteinases) são enzimas abundantes nos venenos botrópicos, responsáveis por sintomas locais e sistêmicos do envenenamento humano. Estas enzimas hidrolisam componentes de matriz extracelular, plasma e membrana celular, apresentando ainda propriedades não catalíticas que modulam a ativação de plaquetas, células endoteliais e inflamatórias. As SVMPs são sintetizadas como zimogênios e acredita-se que a ativação de sua atividade catalítica seja regulada com a remoção do pró-domínio, como ocorre nas MMPs. Entretanto, ainda não se sabe ao certo como ou onde ocorre o processamento do pró-domínio e a ativação das SVMPs. Considerando a importância do processamento para a modulação da atividade dessa classe de toxinas, pretendemos, neste projeto, identificar a localização exata (em que compartimento celular ou da glândula de veneno) ocorre à ativação das SVMPs e quais as semelhanças e diferenças com relação às MMPs. Para esse fim, produziremos anticorpos anti-pró-dominio para a identificação das moléculas precursoras por Western-blotting/espectrometria de massas (em amostras de venenos) e por imunofluorescência, em cortes de glândula de veneno e assessórias e em frações sub-celulares das células isoladas das glândulas, mantidas em cultura primária. Estas informações poderão ajudar a entender melhor os processos de regulação da atividade e a biossíntese de metaloproteinases de venenos.