Mudanças Estruturais em Fitocistatinas Híbridas Analisadas por Ressonância Magnética Nuclear de Alta Resolução.

Resumo

Cistatinas são inibidoras de cisteíno-proteases. A maioria são inibidores fracos da catepsina humana B, a qual tem sido associada com câncer, doença de Alzheimer e artrite. Partindo-se das sequências de orizacistatina-1 e canacistatina-1 foi recentemente obtido um clone híbrido, o qual apresentou uma propriedade inibitória mais alta contra a catepsina B. O clone apresentou duas mutações pontuais não esperadas e uma deleção N-terminal. A reversão dessas mutações independentemente ou ambas simultaneamente abole a atividade inibitória. Estudos de modelagem molecular por homologia, em conjunto com estudos experimentais das mutantes reversas, revelam uma correlação entre os determinantes moleculares para o aumento da atividade inibitória com um decréscimo da estabilidade na proteína.No presente projeto serão analisadas o clone híbrido e suas mutantes reversas através da técnica de espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear multidimensional de alta resolução. Possíveis mudanças estruturais, em especial a perda de uma estruturação local, poderão ser identificadas através dos espectros 15N-HSQC, e poderão ser correlacionadas com alterações das capacidades inibitórias das diversas amostras.