Análise em Larga Escala da Expressão de MicroRNAs em Células Osteoblásticas Crescidas sobre Titânio com Nanotopografia

Resumo

MicroRNAs (miRs) são pequenos RNAs funcionais, com aproximadamente 22 nucleotídeos, que não codificam proteínas e estão envolvidos em diversos processos biológicos, incluindo a diferenciação osteoblástica in vitro e a formação óssea in vivo, eventos diretamente relacionados ao processo de osseointegração de implantes de titânio (Ti). Sabe-se que superfícies de Ti com nanotopografia favorecem a mineralização da matriz extracelular; no entanto, os mecanismos celulares envolvidos não são completamente entendidos. Nesse sentido, é possível especular que miRs fazem parte da maquinaria celular que regula a interação entre osteoblastos e superfícies de Ti. O objetivo do presente projeto é analisar a expressão em larga escala de miRs em células osteoblásticas crescidas sobre superfícies de Ti com nanotopografia. Células osteoblásticas diferenciadas a partir de células mesenquimais derivadas de medula óssea de humanos serão cultivadas sobre discos de Ti com e sem nanotopografia e serão avaliados os seguintes parâmetros: proliferação e viabilidade celulares; expressão gênica (RNA mensageiro - RNAm), por Real-time PCR, e proteica, por Western blot, de Runx2, fator de transcrição essencial para o estabelecimento do fenótipo osteoblástico; formação de matriz mineralizada e expressão de miRs por Microarray. Por fim, miRs que apresentarem alterações significativas de expressão na análise por Microarray, redução ou aumento de cinco vezes, quando comparadas as superfícies de Ti com e sem nanotopografia, serão submetidos à análise por Real-time PCR para a validação dos dados.