Padronização e avaliação de PCR multiplex para o diagnóstico de Escherichia coli enteroagregativa típica e atípica

Resumo

Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) é considerada um enteropatógeno emergente, caracterizada pela expressão do padrão de adesão agregativa (AA) em células epiteliais cultivadas. Vários potenciais fatores de virulência associados à EAEC têm sido descritos, entretanto a patogênese da diarréia causada por este patótipo não está esclarecida. Vários destes fatores são codificados por genes localizados no plasmídeo de virulência de EAEC (pAA), incluindo o gene aggR, que codifica uma proteína reguladora de vários fatores de virulência de EAEC. A classificação de EAEC em típica e atípica se baseia na presença ou ausência do gene aggR, respectivamente. O padrão AA, demonstrado em células HeLa ou HEp-2, é usado como diagnóstico padrão para a classificação de EAEC, uma vez que não há um determinante genético comum para todas as amostra deste patótipo. Entretanto, esta técnica é dispendiosa, demorada e necessita de infra-estrutura específica. Como alternativa, técnicas moleculares de diagnóstico de EAEC começaram a ser desenvolvidas, como a PCR multiplex empregando a detecção simultânea de marcadores plasmidiais (aatA, aggR, aap ou astA) ou plasmidiais e cromossômicos (aatA, astA e aaiA). Esses ensaios detectam principalmente marcadores de virulência plasmidiais, não diagnosticando EAEC atípica. Além disso, vários desses marcadores não são específicos para EAEC (aap e astA), ou sua especificidade não foi determinada (aaiA). Desta forma, o presente estudo visa padronizar e avaliar a especificidade e sensibilidade de uma PCR multiplex de detecção de genes plasmidiais e cromossômicos, para o diagnóstico molecular de EAEC típica e atípica. (AU)