Comparação dos perfis protéicos de plasma seminal e de espermatozóides com baixa e alta fragmentação de DNA

Resumo

Sugere-se que a fragmentação do DNA do espermatozóide é um importante marcador para diagnóstico e prognóstico de infertilidade, uma vez que reduz as taxas de gravidez natural e após a realização de técnicas de reprodução assistida. No entanto, os métodos atuais para avaliação da fragmentação do DNA são caros e trabalhosos, além de não distinguir os danos clinicamente relevantes. Portanto, faz-se necessária a busca por biomarcadores protéicos, que, futuramente, poderão ser usados na avaliação da qualidade do espermatozóide. Em vista disso, o presente projeto propõe o estudo proteômico de plasma seminal e de espermatozóides em pacientes com baixa e com alta fragmentação de DNA de espermatozóides, para posterior comparação e busca por marcadores de fragmentação de DNA. Para isso, primeiramente será feito o processamento seminal e a separação do plasma seminal dos espermatozóides. Em seguida, será avaliada a taxa de fragmentação de DNA em cada amostra por meio do ensaio Cometa alcalino. Com isso, serão selecionados os 20 pacientes com menor taxa de fragmentação de DNA e os 20 pacientes com maior taxa. Para a proteômica, será realizada a eletroforese bidimensional e a identificação das proteínas correspondentes aos spots de interesse por meio de espectrometria de massas (MALDI-ToF MS/MS). Com esses resultados, espera-se obter possíveis marcadores protéicos para a fragmentação de DNA de espermatozóides, tanto no próprio espermatozóide quanto no plasma seminal. Esses marcadores poderão ser utilizados no diagnóstico e no tratamento de infertilidade masculina e na seleção dos espermatozóides sem danos ao DNA para injeção no oócito.