Determinação da influência do meio de armazenamento sobre a viabilidade celular e a produção de polissacarídeo capsular de Streptococcus pneumoniae

Resumo

O S. pneumoniae é um micro-organismo Gram-positivo em forma de lanceta, com 1 a 2 ¼m de diâmetro. Seu principal fator de virulência é o polissacarídeo capsular. Ele faz parte da microbiota do trato respiratório superior do homem e coloniza a nasofaringe. A colonização por S. pneumoniae é bastante comum e a doença pneumocócica acontece quando ele invade outros nichos para causar sinusite, pneumonia ou otite, bem como doenças tão graves como bacteremia, meningite e sepse, podendo levar os pacientes a óbito. Para o cultivo do pneumococo e produção industrial do polissacarídeo capsular (PS) é de fundamental importância gerar bancos de células estáveis, com tempo de vida adequado e que mantenham as características de crescimento celular e de produção de PS. Em nosso laboratório, os estoques congelados de S. pneumoniae de diferentes sorotipos usados para produção de PS capsular têm sido mantidos empregando glicerol como crioprotetor em meio de Greaves, Todd-Hewitt com extrato de levedura ou no próprio meio de produção. Embora, no geral, a viabilidade celular tenha se mantido adequadamente, em várias ocasiões atribuiu-se à qualidade dos estoques congelados mudanças significativas na velocidade de crescimento celular e na produção de PS. Portanto, um estudo sistemático do assunto faz-se necessário e pretende-se estudar aqui o meio STGG (2% leite desnatado em pó, 3% triptona, 0,5% glicose e 10% glicerol), cuja capacidade para preservar as características do pneumococo foi reconhecida em estudos de epidemiologia. O objetivo deste trabalho é estudar o efeito de diferentes meios de armazenamento sobre a viabilidade celular, a velocidade de crescimento e a capacidade de produção de PS dos bancos de células congelados de S. pneumoniae a serem usados para o desenvolvimento de processos de produção industrial de vacinas. O meio STGG e variantes contendo DMSO ou betaína serão avaliados em presença ou não de soro normal eqüino.Este trabalho será desenvolvido com a cepa St595/01 de S. pneumoniae sorotipo 1, fornecida pelo Instituto Adolfo Lutz, São Paulo, SP, Brasil. Realizaremos a reativação da cepa liofilizada fornecida para então preparar os estoques a serem testados. Após ressuspender as células no meio adequado, a suspensão será distribuída em criotubos e congelada rapidamente em nitrogênio líquido. A viabilidade celular será avaliada em uma amostra antes do congelamento. Imediatamente após e depois de 3, 6 e 9 meses, a viabilidade celular será novamente avaliada, bem como o crescimento celular e a produção de PS. Uma vez determinado o melhor meio para armazenamento, ele poderá ser aplicado aos demais sorotipos de interesse do laboratório.