Homocisteína e proteoma plasmático no lúpus eritematoso sistêmico juvenil

Resumo

Até o momento, nenhum fator ou grupo de fatores de risco tem sido suficientes para predizer quais pacientes com Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) terão eventos cardiovasculares ateroscleróticos. Objetivo principal: Correlacionar grupos de pacientes com LES apresentando diferentes valores para o conjunto dos fatores de risco, com o perfil proteômico e de ingestão alimentar utilizando a análise hierarchical cluster. Objetivos secundários: (a) Descrever os níveis de homocisteína, cianocobalamina (vitamina B12), folato, lipoproteínas, proteína C-reativa (PCR), MCP-1 (monocyte chemoattractant protein-1; proteína de quimioatração de monócitos-1), interferon alfa, IL-6 (interleucina-6), TNF-± (fator de necrose tumoral- ±), leptina, adiponectina e grelina em pacientes pediáticos femininos com LES comparando-os a um grupo controle saudável pareado para idade; (b) Descrever o perfil proteômico em soro no mesmo grupo de pacientes pediátricos femininos com LES comparando-o ao grupo controle saudável pareado para idade; (c) Descrever a ocorrência de polimorfismos no gene da enzima metileno-tetrahidrofolato redutase (MTHFR) (genótipos CT, AC, GA) em um grupo de pacientes pediátricos femininos com LES e no grupo controle saudável pareado para idade; (d) Correlacionar a ocorrência de polimorfismo no gene da MTHFR (genótipos CT, AC, GA) com o nível de homocisteína e com a ingestão de energia, macronutrientes, ácido fólico, vitamina B12 e vitamina B6 em pacientes pediátricos femininos com LES e em indivíduos controles em pacientes pediátricos femininos com LES e em indivíduos controles. Material e Métodos: Serão coletadas amostras de 20 ml de sangue de 50 pacientes pediátricos com LES, com idades entre 10 e 18 anos, do sexo feminino, atendidos na Clínica Pediátrica do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Brasil. Cem (100) crianças saudáveis pareadas para gênero e idade farão parte do grupo controle. Os níveis plasmáticos de homocisteína <12 µmol/L serão adotados como referência. DNA genômico de leucócitos será extraído. A presença de polimorfismos C677T, A1298C e G1793A no gene que codifica a enzima MTHFR será determinada por polymerase chain reaction (reação em cadeia da polimerase ou PCR) de restrição do comprimento do fragmento do polimorfismo (RFLP). Vitamina B12, folato, IL-6, PCR, TNF-alfa e homocisteína serão determinados pela técnica de imunoensaio. O Kit ELISA será utilizado na determinação de leptina, adiponectina, grelina, MCP-1 e interferon-alfa. Para a análise do Proteoma, pool de soro de pacientes com LES serão depletados em proteínas de maior abundância (ex. albumina, imunoglobulinas, etc.) e submetidos a digestão enzimática com trypsin. Os peptídeos tripticos resultantes dos grupos serão rotulados com "isobaric tags" (iTRAQ, Applied Biosystems, CA), misturados em pool após marcação e separados em HPLC por troca iônica/fase reversa "on line" com espectrômetro de massas ESI-Q-TOF. Todas as crianças serão submetidas a avaliação nutricional (história alimentar e antropometria). O teste ANCOVA com ajuste para variáveis confundidoras será aplicado para comparação entre dois grupos. P < 0.05 será considerado estatisticamente significante. O teste Qui-quadrado ou o teste exato de Fisher, k-cluster e hierarchical cluster serão usados. (AU)