Clonagem, expressão e purificação de alfa receptores de folato de Homo sapiens para aplicações bioanalíticas em câncer

Resumo

Nos últimos anos a incidência do câncer tem crescido significativamente no contexto mundial, de forma que, segundo a Agência Internacional para Pesquisa em Câncer, o impacto global desta doença mais que dobrou em 30 anos. Por conta das técnicas atualmente empregadas para a detecção da doença não serem individualmente conclusivas devido à subjetividade das análises-além de serem extremamente invasivos-não permitirem o diagnóstico precoce da doença. É gerado, portanto, uma motivação para o desenvolvimento de novas tecnologias alternativas para a detecção do câncer. Recentemente, Lima et al. (2010) relataram a possibilidade do uso de biossensores para a detecção de biomarcadores em urina, sangue ou demais fluidos biológicos, facilitando o diagnóstico da doença em termos de operação, custo e rapidez. Células cancerígenas possuem receptores específicos de alta afinidade com folato e por serem altamente replicativas, estas células são extremamente dependentes do suprimento de folato reduzido. Com raras exceções, alfa receptores de folato (FR-±) é induzido seletivamente em tecidos cancerígenos e raramente expresso em células normais, mostrando-se, assim, altamente sensíveis e específicos. FR-± são proteínas extracelulares de 239 resíduos de aminoácidos, com propriedades bioquímicas específicas as quais podem ser exploradas pela estratégia de marcação para detecção e tratamento do câncer (biomarcadores). Neste presente projeto propõem-se a clonagem, expressão e purificação do FR-±, para subsequente imobilização das mesmas em microssistema e estudos com o biossensor desenvolvido por Lima et al. (2010). Desse modo, a biocaracterização ou caracterização bioanalítica da proteína FR-± recombinante (r-FR-±) será útil para entender o papel desta proteína no desenvolvimento de tecidos tumorais bem como para o desenvolvimento de drogas que possivelmente inativarão esta proteína, como os antifolatos, que são hoje os agentes antineoplásicos mais investigados.