Estudo da expressão de proteínas reguladoras da apoptose em modelo in vitro que mimetiza áreas in situ de neoplasia maligna.

Resumo

Diversos estudos têm demonstrado a importância das células mioepiteliais no comportamento das neoplasias de glândulas salivares e de mama. Nos tumores de glândulas salivares, a sua presença está associada ao melhor prognóstico dos mesmos. Em mama, sua função está relacionada, principalmente, na transição do carcinoma in situ a invasivo. Estes estudos têm evidenciado o papel destas células como supressoras de tumor, promovendo defesa importante contra o câncer. Neste microambiente, o estudo do desequilíbrio entre os mecanismos de regulação da proliferação celular e de apoptose, tanto nas células malignas quanto nas células mioepiteliais, pode contribuir para o melhor entendimento da progressão tumoral. Alterações nos níveis de expressão das proteínas que regulam a apoptose têm sido relatadas em muitos tipos de câncer, modulando a invasão e progressão do mesmo. Assim, o objetivo do presente estudo será avaliar a expressão das proteínas reguladoras da apoptose, Bcl-2, Bax 1 e Survivin, em um modelo de tumorigênese in vitro mimetizando uma situação in situ onde células neoplásicas de carcinoma epidermoide apresentam-se envoltas por células mioepiteliais benignas do adenoma pleomórfico, em diferentes tempos de cultivo celular a fim de se identificar o momento de expressão e papel destas proteínas na regulação do processo neoplásico. Para tanto, serão cultivadas células mioepiteliais benignas de adenoma pleomórfico, adicionando-se meio condicionado não filtrado de células malignas de carcinoma epidermoide, em um componente da matriz extracelular (fibronectina), mimetizando, assim, um modelo de tumorigênese in situ. A expressão dos marcadores regulares da apoptose, Bcl-2, Bax 1 e Survivin, nas áreas simuladoras da condição in situ, em diferentes tempos de cultivo, será avaliada qualitativamente por imunofluorescência indireta e quantitativamente pela expressão gênica destas proteínas pela técnica de PCR em tempo real.