Efeitos da congelação lenta e vitrificação em embriões caninos

Resumo

Embriões caninos são materiais biológicos escassos devido às dificuldades inerentes a coleta de embriões produzidos in vivo e principalmente devido aos obstáculos da produção in vitro. Os procedimentos para transferência de embriões obtidos in vivo não tem sido desenvolvidos de forma adequada, com somente seis tentativas descritas na literatura que resultaram no nascimento de 45 filhotes. A taxa de fertilização in vitro é particularmente baixa (aproximadamente 10%) e a incidência de polispermia é alta, o que explica a ausência de filhotes produzidos in vitro. A criopreservação de embriões caninos e subseqüente transferência, poderia ser particularmente relevante em tecnologia reprodutivas, permitindo otimizar o transporte e o armazenamento de material genético e poderia ainda auxiliar na eliminação de doenças verticalmente transmitidas. Essa técnica poderia contribuir também para o aumento do sistema de cobertura de cães guia e cães de trabalho. Objetiva-se com este estudo viabilizar e comparar os métodos de criopreservação - congelação lenta x vitrificação de embriões caninos e avaliar o efeito desses procedimentos na viabilidade, ultraestrutura e expressão gênica destas estrutura. Os embriões serão produzidos in vivo através de inseminações artificiais programadas; as cadelas serão submetidas à OSH e os embriões coletados na fase de blastocistos. Serão utilizados 78 embriões caninos divididos em três grupos, Controle (CONT, n = 26), Vitrificado (VITR, n = 26) e Congelado (CONG, n = 26). O grupo VITR será vitrificados pela técnica "cryotop" e o grupo CONG congelado em máquina de congelação programável. Após aquecimento os embriões permanecerão por 24 horas em cultivo in vitro em meio SOFaa. As avaliações de reexpansão, viabilidade por sondas fluorescentes, expressão gênica e microscopia eletrônica serão realizadas em todos os grupos. (AU)