Comparação entre a maturação in vitro convencional e um sistema de simulação da maturação oocitária fisiológica (spom) em complexos cumulus-oócito bovinos

Resumo

A ineficiência da maturação in vitro (MIV), em relação à maturação in vivo, é decorrente da retomada espontânea da meiose I no oócito, quando retirado do folículo ovariano. O AMPc, entre outros fatores, é uma molécula fundamental na regulação da maturação. A queda do AMPc intraoocitário leva a retomada prematura da meiose I e, como consequência, da assincronia entre a maturação citoplasmática e nuclear. Diversos agentes que estimulam a síntese ou inibem a degradação do AMPc no oócito têm sido utilizados com o objetivo de simular uma maturação mais fisiológica e, consequentemente, melhorar a produção in vitro (PIV) de embriões. Esses conhecimentos permitiram o desenvolvimento do sistema SPOM (simulação da maturação oocitária fisiológica), que consiste em um período prolongado de maturação simultaneamente ao atraso na maturação nuclear pela adição de agentes que mantém o AMPc intraoocitário em altas concentrações. O sucesso da SPOM na produção in vitro de embriões de camundongo e bovinos motiva investigações mais detalhadas sobre o mecanismo celular e molecular desse sistema. Sabe-se que o oócito I - parado no estágio de vesícula germinativa (VG), também denominado de núcleo dictiado da prófase I - tem alta atividade transcricional e, consequentemente, o bloqueio da maturação nuclear permite o armazenamento de RNAs, que darão suporte ao desenvolvimento do embrião até a ativação do seu próprio genoma. Além disso, o sistema de maturação (convencional), o qual os oócitos são submetidos, pode alterar a maquinaria molecular que regula seu desenvolvimento. Portanto, o presente projeto tem como principal objetivo identificar genes diferencialmente expressos entre os sistemas de MIV convencional e de SPOM. Para tanto, complexos cumulus-oócito bovinos - obtidos de abatedouro e majoritariamente de origem zebuína - serão maturados (sistema convencional e SPOM) e submetidos à análise de expressão gênica global pela técnica de microarranjo. Em seguida, oito genes candidatos serão selecionados pela diferença da expressão entre os sistemas e validados por PCR em tempo real. A funcionalidade do sistema SPOM será avaliada pela maturação nuclear do oócito e quantificação das junções gap nas células do cumulus. Ao final da PIV, as taxas de blastocistos e a qualidade embrionária também serão avaliadas. Acredita-se que a identificação dos genes, diferencialmente expressos, e a relação com suas funções possam ajudar a compreender os mecanismos que regulam a maturação in vitro do oócito e, futuramente, melhorar as condições de maturação e de produção in vitro de embriões bovinos.