Detecção e diferenciação molecular das espécies Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides lutzii em amostras ambientais

Resumo

O solo é o provável habitat do(s) fungo(s) patogênico(s) dimórficos Paracoccidioides brasiliensis e P. lutzii. Este pressuposto é baseado principalmente na elevada frequência de infecção em trabalhadores rurais e no frequente isolamento de P. brasiliensis em tatus, animais que vivem literalmente imersos no solo, de onde o fungo pode e vem sendo repetidamente detectado pelas técnicas moleculares baseadas na PCR e Nested PCR. O presente projeto visa detectar e diferenciar as espécies Paracoccidioides brasiliensis (complexo S1, PS2 e PS3) e Paracoccidioides lutzii no ambiente, pelas técnicas de Nested PCR e TSA-FISH, em amostras ambientais aerossóis e solo de tocas de tatus provenientes de áreas endêmicas para a Paracoccidioidomicose nas regiões Sudeste e Centro-Oeste brasileiras. A hibridização com sondas de oligonucleotídeos denominada FISH (Fluorescence in situ Hybridization) quando associada à técnica de TSA (Tyramide Signal Amplification) amplifica o sinal emitido pela sonda fluorescente, aumentando assim sua sensibilidade. Além da detecção ambiental de Paracoccidioides spp. por métodos moleculares, será também estudada a ocorrência de tatus infectados com P. lutzii no centro-oeste brasileiro por métodos clássicos de cultivo e moleculares, uma vez que esta é uma região de grande prevalência desta espécie e nenhum tatu foi avaliado até o presente momento. O atual mapa da distribuição geográfica de isolados do gênero Paracoccidioides é baseado principalmente em isolamentos de amostras clínicas humanas e estas sofrem interferência de fatores como a migração dos hospedeiros, assim, acreditamos que a proposta deste projeto apresenta grande potencial para um melhor entendimento da biogeografia de Paracoccidioides spp., já que a detecção do fungo será realizada diretamente em amostras ambientais e de tatus, animais que caracteristicamente não possuem hábitos migratórios. O presente projeto poderá, eventualmente, fazer parte de uma das frentes de trabalho de um projeto temático, cujo esboço foi discutido no último congresso da ISHAM, Berlim em junho de 2012, e que tem como objetivo principal avaliar os significados da ocorrência de mais de uma espécie causadora da paracoccidioidomicose, em seus aspectos ecoepidemiológicos, diagnósticos, clínicos e de resposta aos tratamentos. Nesta proposta maior (temático), os aspectos ecológicos destes agentes deverão ser abordados em âmbito nacional e até mesmo em demais países do continente Sul-Americano como, por exemplo, Venezuela e Colômbia. (AU)