Avaliação da expressão gênica em larga escala de células osteoblásticas da calvária e medula óssea de ratas ovariectomizadas.

Resumo

Atualmente, as células mesenquimais de diversas origens são consideradas fontes para substituição de tecidos; estas células tem potencial osteogênico e podem ser elegíveis para o reparo e manutenção do tecido ósseo, sendo muito atrativas para a engenharia tecidual. Entretanto, mudanças no seu comportamento podem ser causadas por fatores como a osteoporose, afetando a sua habilidade de auto-renovação e diferenciação. Sendo assim, o objetivo do presente projeto é comparar a expressão gênica de células mesenquimais diferenciadas em células osteoblásticas provenientes da medula óssea com o de células osteoblásticas já diferenciadas provenientes da calvária. Serão utilizadas 18 ratas Wistar divididas em grupos controle e tratado (indução da osteoporose). As ratas do grupo tratado serão submetidas à ovariectomia bilateral através de protocolo adequado e após 150 dias da cirurgia, as ratas de ambos os grupos serão sacrificadas para coleta dos fêmures e de fragmentos da calvária. A partir dos materiais coletados, serão isoladas as células mesenquimais da medula óssea e as células osteoblásticas da calvária e colocadas em garrafas de cultura com meio de cultura suplementado para proliferação e posterior extração do RNA. Será realizada a identificação de genes induzidos e reprimidos nas células de ratas controles e com osteoporose utilizando lâminas Agilent para microarray e miRNA (n=3). Os dados serão analisados com o auxílio de programas de bioinformática especializados como SAM (significance analysis of microarrays), Cluster-TreeView e GeneNetwork e a plataforma de bioinformática GeneSpring (Agilent). A partir destes dados de níveis de transcrição reconstruiremos redes de interação gênica para avaliarmos em conjunto o papel de cada um em resposta à indução da osteoporose.