Purificação e caracterização da glicoproteína do vírus da raiva produzida pelos sistemas S2 (Drosophila melanogaster) e Semliki Forest Vírus recombinante

Resumo

A glicoproteína recombinante do vírus da raiva (RVGP) tem sido produzida e estudada pelo laboratório de Imunologia Viral, com a finalidade de obtenção de um eficaz imunógeno e potencial candidato a uma vacina de terceira geração contra a raiva. Para esse fim, dois sistemas têm sido amplamente estudados: células Schneider 2 - S2 - de Drosophila melanogaster e o vírus Semliki Forest (SFV). A RVGP produzida por esses sistemas já foi utilizada em experimentos de imunização apresentando características imunogênicas importantes. Neste projeto primeiramente obteremos uma linhagem de células S2 expressando grandes quantidades da RVGP com cauda de histidina. Em seguida, a RVGP proveniente de cultivos S2 e de células de mamíferos infectadas com SFV será purificada com auxílio da cauda de histidina presente em ambas as construções. A RVGP recombinante será então caracterizada físico-química e antigenicamente. Para isso aplicaremos técnicas de preparação membranária a partir das células expressando a RVGP, solubilização da RVGP recombinante a partir das membranas e aplicação de técnicas de purificação, principalmente ultracentrifugação, cromatografia e imunoprecipitação. No desenvolvimento dessas atividades, faremos ainda um estudo das linhagens de células de mamíferos mais adequadas para a infecção com SFV, analisando a capacidade de penetração do vírus e a produção da RVGP. (AU)