Avaliação das subpopulações espermáticas no ejaculado de cães, visando a análise de fertilidade e criopreservação

Resumo

Este estudo tem como objetivo identificar animais de maior e menor fertilidade e testar seu comportamento frente aos procedimentos de criopreservação através da análise de agrupamentos das subpopulações espermáticas (SE) e de fertilidade. O sêmen será avaliado para a determinação e avaliação de SE através da análise computadorizada da cinética espermática (CASA), da integridade da membrana plasmática, da quantificação de apoptose espermática e pela avaliação da capacitação espermática e reação acrossomal, durante o processo de criopreservação. Serão realizados dois experimentos: no Experimento 1, serão determinadas as SE, durante o processo de criopreservação do sêmen de 5 cães, utilizando quatro ejaculados de cada animal; as análises serão realizadas nos momentos de pós-coleta, pós-refrigeração e pós-descongelação. As avaliações da cinética espermática serão realizadas pelo CASA e a integridade das membranas espermáticas por citometria de fluxo usando uma combinação dos fluorocromos: iodeto de propídio (IP) e aglutinina de Pisum sativum conjugada ao isotiocionato de fluoresceína (FITC-PSA). A apoptose será avaliada pela Anexina-V e a capacitação espermática pela combinação dos fluocromos merocianina-540 (M540) e Yo-Pro 1. Com a análise dos resultados os machos serão separados como os de maior e menor fertilidade (HIF e LOF). Dentre os 5 cães serão escolhidos um (1) HIF e um (1) LOF serão utilizados no Experimento 2. No Experimento 2, as subpopulações de maior potencial fertilizante serão identificadas nos dois cães selecionados no experimento I e avaliadas in vivo por meio da Inseminação Artificial. Para isso o método de separação espermática a ser utilizado será o Gradiente PureSperm® com densidades de 80 e 40 (DOURADO et al. 2011). A inseminação artificial será realizada em um grupo de 20 cadelas para comparação quanto aos resultados de fertilização entre os cães de maior fertilidade (HIFS, n = 10) e o de menor fertilidade (LOFS, n = 10). A inseminação artificial transcervical será realizada com o auxílio de endoscópio rígido para visualização do anel cervical e cateterização. Decorridos 10/12 dias após a ovulação a ováriosalpingohisterectomia (OSH) destas cadelas será feita para a identificação, contagem e avaliação dos embriões. (AU)