Comparação dos efeitos dos ácidos cafeico e clorogênico sobre a metilação, citotoxicidade, genotoxicidade e expressão gênica em células humanas Jurkat, HL-60 e JMA expostas ao agente desmetilante 5-azacitidina

Resumo

A influência de compostos bioativos da dieta no genoma tem sido evidenciada nos últimos anos, sendo destacado o papel relevante destes compostos na modulação epigenética. A associação de compostos da dieta e medicamentos utilizados na terapia do câncer representa uma alternativa promissora com o intuito de aumentar a eficácia do tratamento e minimizar efeitos adversos. Agentes desmetilantes de DNA têm sido empregados no tratamento de leucemias, e atuam alterando o padrão de metilação do DNA. Esse mecanismo promove uma reativação da expressão de genes silenciados, como genes supressores de tumor, sendo esta abordagem evidenciada em vários estudos com linhagens celulares leucêmicas. A hipótese deste projeto é que medicamentos que modulam epigeneticamente o DNA, como a 5-azacitidina, utilizados no tratamento de leucemias poderiam apresentar uma maior eficácia e redução dos efeitos adversos quando associados a compostos bioativos da dieta. Nesse sentido, os ácidos cafeico e clorogênico podem representar uma possibilidade promissora, uma vez que estes compostos fenólicos estão presentes em vários alimentos da dieta humana e, além disso, a inibição do crescimento celular em linhagens tumorais e os efeitos protetores em linhagens normais evidenciados na literatura podem favorecer a eficácia dos agentes desmetilantes. Assim, o objetivo deste projeto é avaliar a influência dos ácidos cafeico e clorogênico associados ou não ao agente desmetilante 5-azacitidina sobre a metilação em regiões promotoras dos genes supressores de tumor CDKN2 e CDH13 nas linhagens celulares leucêmicas HL-60 e Jurkat, e na linhagem celular JMA, derivada de fibroblastos humanos de medula óssea. Adicionalmente, serão realizados ensaios de citotoxicidade, genotoxicidade pelo teste do cometa e pela análise do "Citoma", e a detecção de apoptose por citometria de fluxo. Além disso, com o intuito de verificar a modulação da expressão de genes supressores de tumor, será realizada a análise da expressão de RNA mensageiro dos genes CDKN2 e CDH13 por PCR em tempo real.