Efeito da técnica de isolamento, fonte do tecido e passagem celular no número e fenótipo de células-tronco originárias da polpa dentária

Resumo

A utilização de células-tronco provindas do tecido pulpar tem sido frequentemente relatada entre as técnicas de regeneração tecidual. Entretanto ainda não está descrito de forma detalhada a caracterização destas células, bem como qual população (células pulpares de dentes decíduos ou permanentes) seria mais eficiente para os diversos tipos de terapias. Deste modo, o objetivo do presente estudo será expandir cultura primária de células pulpares obtidas de dentes decíduos humanos esfoliados e 3º molares utilizando duas diferentes técnicas e comparar, por meio de testes específicos, a característica e quantidade de células-tronco em cada modelo. Para o estudo, o tecido pulpar, de 10 dentes decíduos esfoliados e 10 terceiros molares humanos, será obtido e dividido em duas partes, sendo as células isoladas por dois tipos de técnicas (explante e digestão enzimática). Após a expansão das culturas, a partir da 2ª passagem, serão realizados testes específicos para a caracterização e identificação de células-tronco. A imunofenotipagem será realizada por meio dos testes de imunofluorescência e citometria de fluxo, utilizando anticorpos específicos para marcação de células-tronco (nestina, vimentina, SH2, SH3 e Oct3/4). Ainda será realizada a cariotipagem das células, com o objetivo de confirmar a ausência de alterações cromossômicas brutas durante a cultura. Uma análise qualitativa será realizada com as imagens adquiridas com os testes de imunofluorescência e cariotipagem. Já para a citometria de fluxo, os dados serão avaliados quanto a sua distribuição, caso haja distribuição normal, será aplicado o teste de análise de variâncias a dois critérios fixos (tipo celular e número da passagem) complementados pelo teste de Tukey, se necessário. Caso a distribuição seja não normal os testes não-paramétricos serão os de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney. O nível de significância será de 5%. (AU)