Análise da diferenciação de células tronco mesenquimais provenientes de líquido amniótico humano estimuladas com IGF-1 em condrócitos, cultivadas em micromass e sobre matriz tridimensional

Resumo

As lesões condrais e osteocondrais articulares têm pouca habilidade de reparação e frequentemente evoluem para alterações degenerativas, como a osteoartrite (OA), a mais prevalente das doenças reumáticas dos idosos. Atualmente o tratamento é sintomático e quando a lesão se encontra num grau avançado, recorre-se à artroplastia. Há um grande interesse no desenvolvimento de novas formas de tratamentos cada vez mais eficazes para este tipo de lesão, tanto nas resultantes de traumas quanto as secundárias à OA, principalmente nos seus estágios iniciais com o intuito de evitar ou postergar as artroplastias. As células tronco mesenquimais (CTM) provenientes do líquido amniótico humano (LAH) apresentam o potencial de se diferenciar em células das três camadas germinativas o que as torna úteis na medicina regenerativa. Nosso laboratório já comprovou a condrogênese a partir dessas células sob estímulo de TGF-²3 (dados em fase de peer review). Portanto, o objetivo deste estudo será agora observar a condrogênese a partir de CTMs de amostras de LAH (fornecido pelo serviço de medicina fetal dessa Universidade, obtido de mulheres grávidas que por indicação médica formal, segundo protocolo, forem submetidas à amniocentese). Desta vez a condrogênese será observada estimulando-se as CTMs com o fator de crescimento insulina-like-1 (IGF-1), aliado a modelos de cultura de alta densidade - micromass, bem como com co-culturas em matriz tridimensional (polímeros de alginato combinado com quitosana e pluronic). A condrogênese será avaliada pela expressão dos genes do colágeno tipo II, agrecano e SOX-9, específicos da cartilagem articular e a produção do colágeno II por Western Blotting. Sera realizada ainda a análise histológica com colorações específicas para cartilagem (Safranina O, Alcian Blue, Tricrômio de Masson e HE). (AU)