Influência do peptídeo de fusão da dengue em monocamadas de Langmuir e bicamadas modelo

Resumo

A possibilidade de estudar mecanismos de funcionamento e a complexidade de um sistema biológico utilizando-se sistemas auto-organizados é de grande interesse na comunidade científica. Grande parte dos processos biológicos se dá na interface da membrana biológica e a mimetização desta através de monocamadas de Langmuir e bicamadas lipídicas se mostra de grande valia por serem de fácil obtenção e controle molecular. O desenvolvimento de métodos que permitem caracterização direta na escala molecular abre uma nova maneira de estudar, por exemplo, sistemas envolvendo o mecanismo básico de entrada de vírus nas células hospedeiras pelo processo de fusão membranar. Estudos em fusão de membranas sugerem que o vírus da Dengue tem como porta de entrada no hospedeiro a fusão de membranas pelo auxílio dos chamados peptídeos de fusão, formando em seguida uma única membrana. Atualmente, o vírus da Dengue representa um sério caso de saúde pública no Brasil; até abril deste ano, foram confirmados mais de trinta mil casos de Dengue só na cidade de São Paulo. As constantes mutações dos vírus tornam avanços de novos medicamentos e vacinas no combate a essa doença um desafio na comunidade científica. São cada vez mais necessários estudos dos mecanismos de ação para que haja protocolos melhorados no tratamento e obtenção de novas drogas ao combate à disseminação do vírus. Neste projeto, pretendemos averiguar o comportamento do peptídeo de fusão do vírus da Dengue FLAg principalmente em monocamadas de Langmuir variando sua composição lipídica. Utilizaremos técnicas de caracterização de monocamadas como microscopia no ângulo de Brewster (BAM) e espectroscopia infravermelha de superfície (PM-IRRAS) no intuito de observar alterações no empacotamento lipídico causadas pela adsorção do peptídeo na monocamada, possível formação de domínios e separações de fase. Experimentos de cinética de adsorção revelarão como se dá a incorporação do peptídeo na interface. Além disso, pretendemos monitorar o processo de fusão induzido pelo FLAg entre membranas de vesículas unilamelares gigantes (GUVs) através da combinação de observação por microscopia confocal com ensaios de FRET (Föster ressonance energy transfer). (AU)