Sistemas cromatográficos multidimensionais (nano-HPLC e microchip) hifenizados a espectrometria de massas sequencial de alta resolução para proteômica quantitativa

Resumo

Dentre as ciências ômicas, a proteômica, é a que mais tem despertado interesse da pesquisa científica devido a sua grande capacidade de criar novas tecnologias em diversas áreas, como a elucidação de doenças, desenvolvimento de produtos (farmacêuticos, alimentícios e cosméticos), além do compreendimento da constituição dos seres vivos. Entretanto, a solução para o estudo adequado de um proteoma depende do conjunto de técnicas analíticas, computacionais e matemáticas sofisticadas devido à enorme complexidade das amostras biológicas. Além disso, a obtenção de resultados confiáveis, requer que o método seja otimizado e, ainda, espera-se que as análises sejam simples e rápidas. Com o objetivo de solucionar estes desafios, este projeto visa desenvolver duas abordagens para a proteômica shotgun quantitativa (label-free): 1) a nano cromatografia líquida multidimensional abrangente hifenizada a espectrometria de massas sequencial de alta resolução (MS/MS) e 2) a fabricação de um microchip multidimensional abrangente com eletronebulização para MS/MS. A primeira estratégia se destaca pelos princípios químicos consolidados da ciência de separação, fato que permite um método robusto, sensível e com elevada capacidade de pico e ortogonalidade. Neste estudo, propomos uma configuração inédita na escala nano fluídica e baseada em princípios experimentais e estatísticos, por meio da quimiometria, que podem permitir alta eficiência de separação com análises rápidas. Por outro lado, à segunda abordagem, destaca-se pela possibilidade teórica do aumento de ortogonalidade e poder de resolução em separações para sistemas miniaturizados, e principalmente pela portabilidade, simplicidade e versatilidade instrumental. Trata-se de uma inovação em sistema microfluídico multidimensional (todo integrado ao chip) acoplado ao MS/MS para o mesmo tipo de amostra e estratégia quimiométrica.