Efeitos da centrifugação do sêmen em camada única de Percoll Plus® antes da congelação sobre as características morfo-funcionais de espermatozoides avaliadas in vitro e in vivo após IATF

Resumo

O presente trabalho tem por objetivo verificar os efeitos da seleção espermática, pré-congelação, através de centrifugação em camada única de Percoll Plus® (CCUPP), em diferentes concentrações de coloide, com ou sem pré-diluição do sêmen, bem como de diferentes concentrações de espermatozoides/palheta, avaliando-se as características morfo-funcionais de espermatozoides bovinos, in vitro, pós-descongelação, além da taxa de FIV e IATF. O sêmen de quatro touros Nelores, mantidos em central de IA, será coletado através de vagina artificial. No exp. 1, o ejaculado de cada um dos touros (seis replicas) será misturado e dividido igualmente (1 bilhão de espermatozoides) entre os grupos, sem diluição (SD) ou diluído (D), meio base de congelação, na concentração de 250 x 106 de espermatozoides/mL, antes da CCUPP, em gradientes de coloide de 90% e 70%, constituindo os grupos 90SD, 70SD, 90D e 70D. No exp. 2, doses inseminantes com 30, 20 e 15 x 106 de espermatozoides serão comparadas, após congelação, a partir de amostras seminais previamente obtidas através de CCUPP (adotando-se o melhor resultado do exp. 1). No exp. 3, dois grupos, sendo um controle (sem CCUPP) e outro com CCUPP serão comparados, adotando-se o melhor resultado do experimento 2. Em todos os experimentos a seleção espermática será feita com deposição do sêmen sobre uma coluna de 9 mL de Percoll Plus®, montada em tubo de 15 mL, seguida de centrifugação a 700 x g/13 min. A seguir, as amostras serão congeladas/descongeladas para análises de cinética espermática(CASA), morfologia, alterações morfo-funcionais (sondas fluorescentes; integridade de membrana plasmática - MP, integridade de membrana acrossomal, função mitocondrial, ROS intracelular, peroxidação lipídica, estabilidade de MP, fosforilação da tirosina e estrutura da cromatina; em citômetro de fluxo), além da observação das taxas de FIV e de concepção, após IATF. ANOVA e testes de Tukey, de regressão logística e de correlação de Pearson serão empregados para análise dos resultados, com P<0,05 aceito como significativo. (AU)