Humanização e expressão da luciferase do vagalume Macrolampis sp2 para biosensor de pH intracelular

Resumo

Bioluminescência, a emissão de luz visível por organismos vivos, é amplamente utilizada em biossensores. Genes de luciferases de vagalumes estão entre os genes repórter mais utilizados em biossensores bioluminescentes. Luciferases de vagalume são pH-sensíveis exibindo um grande desvio do espectro para o vermelho em pH ácido, uma propriedade que tem sido considerada muito inútil para a maioria das aplicações. No entanto, atualmente biossensores de pH intracelulares estão em demanda, sendo alguns deles fluorescentes e raciométricos. Assim nós pensamos em usar a sensibilidade ao pH da luciferase do vagalume como uma vantagem de medir o pH intracelular raciometricamente. Nós já mostramos uma relação entre o pH e a razão de intensidades dos espectros de bioluminescência na região do verde e vermelho, que podem ser usadas para estimar raciometricamente o pH intracelular em bactérias. O objetivo deste projeto é usar a luciferase do vagalume Macrolampis sp2 como biossensor de pH intracelular em células de mamíferos. Para isso pretendemos humanizar a luciferase de Macrolampis sp2, expressá-la em células de mamíferos e investigar variações de pH intracelulares raciometricamente.