Expressão da luciferase do vagalume Macrolampis sp2 em células de mamíferos para biossensor de pH intracelular

Resumo

Bioluminescência, a emissão de luz visível por organismos vivos, é amplamente utilizada em biossensores. Genes de luciferases de vagalumes estão entre os genes repórter mais utilizados em biossensores bioluminescentes. Luciferases de vagalume são pH-sensíveis exibindo um grande desvio do espectro para o vermelho em pH ácido, uma propriedade que tem sido considerada muito inútil para a maioria das aplicações. No entanto, atualmente biossensores de pH intracelulares estão em demanda, sendo alguns deles fluorescentes e raciométricos. Assim nós pensamos em usar a sensibilidade ao pH da luciferase do vagalume como uma vantagem de medir o pH intracelular durante a divisão celular e apoptose. O objetivo desse projeto é usar a luciferase do vagalume Macrolampis sp2 como biossensor de pH intracelular para células de mamíferos. Para esse propósito, nosso objetivo é expressar a luciferase de Macrolampis sp2 em células de mamíferos e investigar a alcalinização do pH intracelular por meio da análise da bioluminescência de uma única célula no microscópio de bioluminescência, um resultado interessante obtido preliminarmente e ao acaso no projeto BEPE nº 2015/22603-4 que precisa ser reproduzido.