Regulação epididimária da fertilidade no homem

Resumo

A análise seminal - método inicial de avaliação do potencial fértil masculino - possui baixa correlação com a fertilidade, sendo insuficiente como método diagnóstico de infertilidade masculina. É importante que haja a melhor compreensão dos mecanismos moleculares que levam a alterações nos espermatozoides e, consequentemente, a problemas de fertilidade em homens. Dentre as moléculas que são relacionadas à função dos espermatozoides, destacam-se as proteínas do plasma seminal, as quais são capazes de se ligar aos espermatozoides e atuar na sua sobrevivência, na regulação da motilidade e da capacitação, na resposta imune no trato reprodutor feminino e na fusão do espermatozoide com o oócito. Alguns estudos anteriores do nosso grupo nos permitiram entender o ambiente proteômico do plasma seminal na infertilidade masculina. Dentre as proteínas encontradas, destaca-se a proteína ELSPBP1 (Epididymal sperm-binding protein 1), hiperexpressa em espermatozoides de amostras com alta fragmentação de DNA. A ELSPBP1 é secretada à luz do epidídimo por microvesículas epididimárias (epididimossomos) e sua função é regulada por meio de metaloproteinases de matriz (MMPs) e suas inibidoras (TIMPs). Hipotetizamos que há transferência de ELSPBP1 dos epididimossomos presentes no plasma seminal para a membrana de espermatozoides danificados, como espermatozoides com DNA fragmentado. Hipotetizamos, ainda, que esta proteína media a ligação desses espermatozoides marcados ao colágeno tipo I, levando à formação de aglomerados de espermatozoides-colágeno, removendo-os da população de espermatozoides saudáveis após a ejaculação. Objetivamos, pois, determinar a utilização da proteína ELSPBP1 como biomarcadora de fragmentação de DNA em espermatozoides humanos em diferentes condições de infertilidade. Os objetivos específicos dos quatro subestudos envolvidos nesse projeto são: (i) determinar a expressão da proteína ELSPBP1 na população ejaculada e em espermatozoides viáveis selecionados por meio de processamento seminal; (ii) determinar a expressão da proteína ELSPBP1 no plasma seminal em diferentes causas de infertilidade masculina; (iii) verificar a expressão de sete proteínas envolvidas na via da proteína ELSPBP1 (ELSPBP1, TIMP1, 2, 3 e 4 e MMP1, 2, e 7) para determinar a sua ação na qualidade seminal, em diferentes causas de infertilidade masculina; (iv) verificar se a proteína ELSPBP1 é capaz de remover espermatozoides com baixa qualidade de DNA da amostra. Para tanto, serão utilizadas as técnicas de imunocitoquímica, Western blotting de espermatozoides e plasma seminal e ensaios multiplex MagPix®, para verificar os níveis da proteína ELSPBP1 e de proteínas de sua via em diferentes condições biológicas, e o método de Magnetic-activated cell sorting (MACS) para avaliar se a proteína ELSPBP1 consegue separar espermatozoides com baixa qualidade de DNA da amostra.