Comparação de métodos de contagem das formas morfológicas de Candida albicans

Resumo

Candida albicans é o principal fungo patógeno que acomete aos seres humanos, esse micro-organismo apresenta a capacidade de se desenvolver em diferentes morfologias (leveduras, pseudohifas e hifas), chamada de polimorfismo. Esse polimorfismo compromete os métodos de quantificação que requerem precisão, como os métodos terapêuticos e também pesquisas que envolvam fungos filamentosos. O objetivo deste estudo será comparar os métodos de quantificação de C. albicans por unidades formadoras de colônias (UFC) e por reação em cadeia de polimerase quantitativa (qPCR) com a contagem de células viáveis e de núcleos celulares no In Cell Analyzer 2000. Culturas planctônicas padronizadas de C. albicans serão desenvolvidas nas formas de levedura e filamentos e submetidas individualmente ou misturadas aos três métodos de quantificação: UFC/mL, contagem celular e qPCR. Para contagem no In Cell Analyzer 2000, a suspensão fúngica será tratada com diferentes marcadores fluorescentes para evidenciar células viáveis, células não viáveis e os núcleos celulares. Para a qPCR um agente intercalante de ligação cruzada ao DNA será utilizado para excluir o DNA de células não viáveis com dano de membrana. Os dados serão submetidos a uma análise de coeficiente de correlação intraclasse e de correlação, a qual, caso exista, será seguida por um estudo de regressão linear múltipla (± = 5%).