Comparação de métodos de quantificação de formas morfológicas e biofilmes de Candida albicans submetidos a terapias antifúngicas

Resumo

Candida albicans é o principal fungo patógeno que acomete os seres humanos e que apresenta a capacidade de se desenvolver em diferentes morfologias (leveduras, pseudo-hifas e hifas), característica essa denominada de polimorfismo. Esse polimorfismo e terapias antifúngicas comprometem os métodos de quantificação que requerem precisão e acurácia, como as pesquisas que envolvem fungos filamentosos. O objetivo deste estudo será comparar os metodos de quantificação de C. albicans por unidades formadoras de colonias (UFC/mL), por reação em cadeia de polimerase quantitativa (qPCR) e por atividade metabólica (Ensaio XTT) com a contagem de células viáveis e de núcleos celulares em Microscópio Confocal após terapias antifúngicas. Cepa padrão de C. albicans (SC5314) será cultivada nas formas de levedura e de filamentos e submetida ao tratamento com fluconazol ou Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) mediada pela curcumina e luz LED. As culturas tratadas serão submetidas a tres metodos de quantificação: UFC/mL, contagem celular e qPCR. Para contagem celular, o Microscópio Confocal será utilizado com a suspensão fúngica tratada com diferentes marcadores fluorescentes para evidenciar células viáveis, células nao viáveis e os núcleos celulares. Para a qPCR, um agente intercalante de ligação cruzada ao DNA será utilizado para excluir o DNA de células não viáveis. Biofilmes também serão cultivados por 48 horas, tratados com fluconazol ou aPDT e submetidos aos mesmos testes mencionados para as culturas planctônicas, além do ensaio de XTT. Os dados serão submetidos a uma análise de concordância (Coeficiente de Correlação Intraclasse e Bland-Altman) e de correlação (alfa = 5%) entre os métodos (UFC/mL, contagem celular, qPCR e XTT).