Modelos de biofilmes multiespécies para o estudo de novas estratégias de tratamento das infecções endodônticas persistentes/secundárias

Resumo

A periodontite apical pós-tratamento é uma doença polimicrobiana. A identificação da composição bacteriana ativa nas infecções endodônticas é essencial para direcionar estratégias eficazes de tratamento. Recentemente, novas abordagens têm sido sugeridas para a remoção de infecções associadas a biofilmes polimicrobianos, incluindo o uso de inibidores do quorum-sensing, enzimas e peptídeos ou aminoácidos antimicrobianos. Recentemente, resultados promissores foram mostrados na inibição da formação de biofilme e/ou diminuição da viabilidade de biofilmes mono-espécies formados por espécies bacterianas orais ou não-orais. No entanto, até o momento, há pouca informação sobre a eficácia das abordagens acima citadas sobre biofilmes multiespécies. Objetivos: Os objetivos deste estudo serão os seguintes: (a) investigar a comunidade bacteriana ativa em dentes com periodontite apical pós-tratamento; (b) examinar os padrões de colonização bacteriana / disposição espacial das bactérias nos cones de guta-percha; e (c) explorar as propriedades antimicrobianas de uma mistura de peptídeos antimicrobianos constituída do lantibiótico nisina e de D-aminoácidos (DDAs) em um modelo de biofilme endodôntico multiespécies. Métodos: Sequeciamento de nova geração (Next Generation Sequence - NGS) baseadas em RNA ribossômico (rRNA) e genes rDNA serão utilizadas para análise de amostras de canais radiculares de dentes com periodontite apical pós-tratamento. O DNA e o RNA serão extraídos das amostras e o DNA complementar (cDNA) será sintetizado por meio da reação de transcrição reversa. DNA e cDNA serão submetidos a PCR com primers que amplificam a região V1-V2 do gene 16S rRNA seguido da análise NGS. A relação entre o rRNA e rDNA de cada unidade taxonômica operacional (OTU) será utilizada como um índice de atividade metabólica de bactérias nas amostras de canais radiculares. A fim de fornecer informações adicionais sobre a colonização bacteriana dos materiais de obturação, as amostras de guta-percha dos canais radiculares serão analisadas utilizando hibridização fluorescente in situ (FISH) e microscopia confocal de varredura a laser (CLSM). Adicionalmente, um modelo de biofilme subgengival modificado, que consiste de 11 espécies, será exposto a uma mistura de peptídeos antimicrobianos e DDAs isolados ou combinados com NaOCl 1%. A viabilidade do biofilme será avaliada pela contagem de unidades formadoras de colônia (UFCs) e análise de imagem por CLSM após coloração de viabilidade bacteriana. (AU)