Modulação da resposta de células T reguladoras na terapia e prevenção da esporotricose. Uso de oligonucleotídeos antisentido como adjuvantes moleculares em vacina recombinante anti-Sporothrix

Resumo

A esporotricose é uma importante micose com distribuição mundial que acomete seres humanos e animais. Dentre as espécies do complexo, S. schenckii sensu stricto é o agente causal presente em todos os países, enquanto S. brasiliensis é especialmente encontrado no Brasil, onde essa infecção já é considerada uma importante zoonose. Muitos casos de esporotricose causadas por arranhaduras de gatos e pelo contato com feridas contaminadas foram relatados em várias cidades do Brasil, principalmente na cidade do Rio de Janeiro, onde a doença ganhou proporções epidêmicas. Mais recentemente, o estado de São Paulo tem reportes crescentes da incidência da doença, sendo atualmente uma preocupação importante para as autoridades de saúde. Um dos fatores de risco que determina a suscetibilidade e a gravidade da doença é o estado imune do hospedeiro. Estudos feitos em nosso laboratório e por outros grupos, já demonstraram o papel da imunidade inata e de diferentes populações de linfócitos T incluindo Th1, Th2 e Th17 na resposta imune contra S. schenckii em modelos de infecção e durante a resposta a um candidato vacinal específico. Os estudos da função das células T regulatórias (Tregs) são um tópico atraente devido à sua importância no controle da resposta imune contra tumores e doenças infecciosas e por seus mecanismos ainda serem pouco conhecidos. As células Tregs são uma população de linfócitos fundamentais no controle da imunidade e do excessivo dano tecidual causado em resposta a diferentes infecções, incluindo aquelas por fungos. Em estudos prévios realizados temos avaliado o papel das células Tregs CD4+CD25+Foxp3+ na infecção por S. schenckii, desde sua frequência durante a infecção por esse patógeno até a determinação da sua atividade e importância para a resposta imune pós-infecção e pós-vacinação em camundongos transgênicos DEREG (do inglês: "DEpletion of REGulatory T cells") com depleção ou não destas células. O efeito das Tregs na eficácia de uma vacina candidata contra a esporotricose também foi avaliada neste modelo, e observamos que a depleção das Tregs esteve associada a um aumento na resposta Th1 e na produção de anticorpos específicos. Esses resultados inéditos nos levam a considerar que a redução das Tregs pode ser uma forma de melhorar a imunogenicidade dessa vacina por meio de silenciadores moleculares de Tregs. Em um estudo piloto feito em parceria com a Universidade de Valencia, Espanha foi confirmado que a administração de um oligonucleotídeo antisentido (ASO) silenciador de Foxp3, o fator de transcrição das células Tregs, melhorou a imunogenicidade de uma vacina recombinante contra S. schenckii. E ainda, em outro estudo prévio de prova de conceito (PoC), demonstramos que uma formulação vacinal composta por seis peptídeos da enolase de Sporothrix spp e o adjuvante de Freund induziu títulos de anticorpos antígeno específicos em camundongos BALB/c que mostraram propriedades protetoras quando transferidos passivamente a camundongos desafiados com S. brasiliensis. Em virtude do adjuvante de Freund ser tóxico para uso clínico e prevendo otimizar a formulação vacinal para um futuro escalamento industrial, propomos no presente estudo avaliar essa tecnologia para o desenvolvimento de vacinas de nova geração para a esporotricose usando o efeito adjuvante de oligonucleotídeos antisentido anti Foxp3 e anti-CTL-4 em uma proteína recombinante, multi-epítopo baseada nas sequências aminoacídicas dos seis peptídeos da enolase de Sporothrix spp. (AU)