"Caracterização estrutural, funcional e imunogênica de duas proteínas de Leptospira interrogans contendo domínios FecR"

Resumo

Leptospiras patogênicas causam a leptospirose, uma zoonose globalmente disseminada. Essas bactérias colonizam os túbulos renais de animais, sendo excretadas na urina. O homem é o hospedeiro acidental e terminal, apresentando diferentes manifestações clínicas. A doença acomete cerca de 1 milhão de pessoas anualmente, resultando em cerca de 60 mil mortes. Os mecanismos de patogenicidade e infecção da Leptospira spp. ainda não estão completamente elucidados. Uma alternativa para compreender tal função está relacionado a desvendar os mecanismos desempenhados por suas proteinas. Proteínas com domínios FecR geralmente estão associadas ao metabolismo do ferro. O papel desse domínio em proteínas de leptospiras ainda não é compreendido. Assim, neste estudo, objetiva-se clonar, expressar e purificar as proteínas contendo o domínio FecR: LIC10902 e LIC20185 de L. interrogans sorovar Copenhageni, e avaliar suas propriedades funcionais e imunogênicas. Para isso, os genes serão amplificados por PCR, clonados no vetor pAE e expressos em diferentes linhagens de Escherichia coli para estudo de solubilidade. A purificação será realizada por cromatografia de afinidade a metal e a estrutura das proteínas será avaliada por dicroísmo circular. A expressão diferencial das proteínas-alvo em estipes patogênicas e atenuadas de L. interrogans e na espécie saprofítica Leptospira biflexa e a alteração de sua expressão frente à escassez de ferro, serão avaliadas por PCR quantitativo em tempo real. A avaliação imunogênica das proteínas em camundongos BALB/c e a determinação da localização das proteínas-alvo na célula bacteriana serão realizadas por ELISA. A detecção imunológica das proteínas-alvo será feita por western blotting com soro hiperimune de camundongos. A interação das proteínas com receptores celulares e componentes humanos associados à matriz extracelular e plasma será testada para caracterização funcional. A obtenção e validação imunológica, estrutural e funcional dessas proteínas contribuirão para avançar os estudos sobre a patogenicidade das leptospiras.