CD40L solúvel está associado com o aumento da explosão respiratória e a liberação das armadilhas neutrofílicas extracelulares na doença de Behçet

• Processo: 18/07458-6
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2018
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2018
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Luiz Eduardo Coelho Andrade
• Beneficiário: Luiz Eduardo Coelho Andrade
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Reumatologia Armadilhas extracelulares
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Behçet's disease | CD40L pathway | neutrophil activation | neutrophil extracellular traps | oxidative burst | sCD40L | Reumatologia

Resumo

Introdução: Estudos prévios sugeriram que fatores solúveis no plasma de pacientes com doença de Behçet ativa (DBa) e inativa (DBi) estimulam a função neutrofílica. O CD40 ligante solúvel (sCD40L) é um mediador importante da inflamação na DB. A sua expressão e o seu efeito na explosão respiratória e na liberação de armadilhas neutrofílicas extracelulares (NET) ainda não foram caracterizados.Objetivo: Investigar o papel do plasma e da via do CD40L na liberação de NET e no perfil oxidativo de pacientes com DBa e DBi.Métodos: Neutrófilos e PBMC foram obtidos de DBa (n=30), DBi (n=31) e controles saudáveis (CS; n=30). A concentração plasmática de sCD40L foi determinada em amostras individuais. Um pool de plasma de cada grupo foi criado. Em alguns experimentos, os pools de plasma foram tratados com CD40 recombinante (rhCD40-muIg) para o bloqueio do sCD40L. A liberação de NET e a produção de H2O2/O2- foram determinados após estímulo com PMA, sCD40L ou o pool de plasma. A análise por citometria de fluxo avaliada pela expressão de: 1) CD40, Mac-1 e da fração fosforilada p65 de NF-kB em neutrófilos e monócitos; 2) CD40L em células T ativadas e plaquetas. A expressão de CD40L em PBMC foi determinada por qRT-PCR.Resultados: Os níveis plasmáticos de sCD40L foram significativamente mais elevados na DBi (mediana/intervalo interquartil=17.234/2.346-19.279 pg/ml) e DBa (18.289/413-19.883 pg/ml) comparados aos CS (47,5/33,7-26.700 pg/ml; p<0,001). A liberação de NET foi constitutivamente mais elevada na DB do que nos CS. A liberação de NET e a produção de H2O2/O2- foram maiores após estímulos com sCD40L ou plasma de BD e inibidas após o bloqueio do sCD40L. A expressão de Mac-1 foi constitutivamente maior em neutrófilos de DBa (88,7±13,2% das células) e DBi (89.2±20.1% of cells) comparada aos CS (27,1±18,8% das células; p<0,01). A expressão de CD40 em fagócitos e de CD40L em plaquetas foram similares nos três grupos. PBMC e as células T CD4 ativadas ou não-ativadas de DB mostraram expressão de CD40L mais elevada.Conclusão: Plasma de pacientes DBa exerce estímulo na liberação de NET e na explosão respiratória, provavelmente induzidos pelo sCD40L. (AU)