Identificação e clonagem dos genes RecA e umuC de Streptomyces coelicolor A3(2) utilizando amplificação enzimática de DNA (PCR)

• Processo: 92/04724-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 1993
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 1995
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Gabriel Padilla
• Beneficiário: Gabriel Padilla
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Streptomyces Clonagem Análise de sequência de DNA Reação em cadeia por polimerase (PCR)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Pcr | Reca | Sequenciamento De Dna | Streptomyces | Umuc

Resumo

O presente projeto tem por objetivo a identificação e clonagem dos genes umuC e recA de Streptomyces coelicolor A3(2). O produto do gene recA possui papel chave nos processos de recombinação e controle da resposta SOS em E. coli. O gene umuC faz parte do operon umuDC e está envolvido em processos de mutagênese induzidos por diferentes agentes genotóxicos. Sua expressão é controlada pelas proteínas RecA e LexA. A utilização de oligonucleotídeos com sequências pré-definidas, baseadas em sequências conservadas já conhecidas, e o advento da técnica de PCR viabilizaram a identificação e clonagem de diversos genes em diferentes microrganismos. No caso de Streptomyces, devido ao seu genoma com alto conteúdo de G+C (70%), que inviabiliza a utilização de sondas produzidas a partir de genes de E. coli (baixo grau de homologia a nível de sequência de DNA), esta técnica parece ser ferramenta poderosa e mais viável. Neste projeto, pretende-se utilizar esta técnica para identificar os genes em questão. Após obtenção de produtos de PCR estes serão clonados e caracterizados para se confirmar serem os fragmentos desejados. Serão, então, utilizados como sondas para varrer biblioteca genômica de Streptomyces coelicolor A3(2). Clones positivos serão mapeados e sequenciados para análise e comparação de sequências. Os trabalhos experimentais serão desenvolvidos no laboratório de genética e biologia molecular de microrganismos do dept. de Microbiologia do Instituto de Ciências Biomédicas da USP. Além da cooperação dos grupos que trabalham neste laboratório, também contaremos com a colaboração do grupo de genética e biologia molecular de Streptomyces do dept. de Microbiologia Geral da Universidade de Osnabruck, Alemanha, liderado pela Dra Hildgund Schrempf. (AU)