Células HEK293T com edição no gene TFAM por CRISPR-Cas9 como um modelo para regulação mitocondrial

• Processo: 21/14766-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2022
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Carlos Eduardo Ambrósio
• Beneficiário: Carlos Eduardo Ambrósio
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Assunto(s): Genes Humanos Edição de genes Edição
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: CRISPR- Cas9 | Edição | gene | Humano | Tfam | Edição de genes

Resumo

O fator de transcrição A mitocondrial (TFAM) é considerado um fator chave no número de cópia do DNA mitocondrial (mtDNA). Visto que o número de cópias ainda não foi totalmente elucidado, investigamos os efeitos da edição gênica e do número de cópias do mtDNA pela tecnologia CRISPR-Cas9 em células HEK293T. O objetivo deste estudo foi gerar um novo modelo in vitro por meio da edição do locus TFAM em células HEK293. Dentre os clones selecionados, sete obtiveram altas taxas de mutação (67-96%) e apresentaram uma diminuição do número de cópias mtDNA em comparação com o controle. As células quando coradas com Mitotracker Red apresentaram uma redução da fluorescência nos clones editados em comparação com os clones não editados. Com isso, nossos resultados sugerem que o número de cópia do mtDNA está diretamente relacionado com regulação do gene TFAM e a sua edição interfere na estabilidade e manutenção mitocondrial. (AU)