Efeito anti-migratório do Dipotássio de Glicirrizinato em linhagens celulares de glioblastoma: dados de microarray para a identificação de microRNAs chaves

• Processo: 22/08525-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2022
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Manoela Marques Ortega
• Beneficiário: Manoela Marques Ortega
• Instituição Sede: Universidade São Francisco (USF). Campus Bragança Paulista. Bragança Paulista , SP, Brasil
• Município da Instituição Sede: Bragança Paulista
• Assunto(s): Glioblastoma Neurociências
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Dipotassium glycyrrhizinate (DPG) | glioblastoma | Metastasis formation inhibition | microRNAs signature | miR-4443 and miR-3620 | Nuclear factor kappa B (NF-kB) pathway | Neurociência

Resumo

A via do fator nuclear kappa B (NF-kB) foi relatada como responsável pelo fenômeno da doença agressiva observado no glioblastoma (GBM). O glicirrizinato dipotássico (DPG), um sal dipotássico do ácido glicirrízico isolado do alcaçuz, demonstrou recentemente um efeito antitumoral nas linhagens celulares de GBM, U87MG e T98G, pela supressão da via NF-kB, especificamente pelos genes IRAK2 e TRAF6, genes alvos dos microRNAs miR-16 e miR-146a, respectivamente. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar os perfis de expressão de miRs relacionados à supressão de NF-ºB na linhagem celular T98G GBM após exposição a DPG usando o microarray de miRs (Affymetrix Human miRNA 4.0A) e considerando apenas miRs preditos como genes reguladores de NF-ºB. Ensaios adicionais usando as linhagens celulares U251 e U138MG foram realizados para validar os resultados observados no array. A citotoxicidade do DPG foi determinada pelo ensaio MTT, a apoptose celular foi quantificada pela fragmentação do DNA e ensaio TUNEL. O efeito antiproliferativo foi observado por ensaios de proliferação celular e wound-healing, e o ensaio de formação de esfera avaliou se o DPG reduziu a formação de subpopulação de células-tronco. Os miRs superexpressos observados no array foram miR-4443 e miR-3620. O efeito citotóxico do DPG em U251 e U138MG foi observado com IC50 de 32 mM e 20 mM por 48 h, respectivamente. A IC50 de cada linha celular foi usada em todos os ensaios posteriores. A apoptose induzida pelo tratamento com DPG é observada por fragmentação de DNA e aumento de células TUNEL-positivas. Os ensaios de proliferação celular e wound-healing demostraram um efeito antiproliferativo e antimigratório do DPG nas linhagens celulares avaliadas. Além disso, o tratamento com DPG levou a uma redução de 100% na formação de esferas. Os resultados de qPCR em células U251 e U138MG demostraram que DPG aumentou a expressão de miR-4443 [2,44 vs. 1,11, valor p=0,11; 8,27 vs. 1,25, valor p=0,04] e miR-3620 [1,66 vs. 1,00, valor p=0,03; 8,47 vs. 1,01, valor p=0,03] e diminuiu os níveis de RNAm de CD209 [0,44 vs. 1,10, valor p=0,03; 0,49 vs. 1,07, valor p=0,04] TNC [0,20 vs. 1,03, valor p=0,001; 0,39 vs. 1,06, valor p=0,01] em comparação com os controles. Nossos resultados sugerem que o DPG inibe a viabilidade celular ativando a apoptose, inibindo a proliferação celular e a formação de subpopulações de células-tronco através da regulação positiva de miR-4443 e miR-3620. Ambos os miRs são responsáveis pela inibição pós-transcricional da via NF-ºB e modulação de CD209 e TNC. (AU)