Organ-on-chip: dinâmica do tráfego do core patológico da vaginose bacteriana no trato genital e tecidos gestacionais e indução de resposta inflamatória compartimentalizada.

• Processo: 24/07342-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2026
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil
• Pesquisador responsável: Márcia Guimarães da Silva
• Beneficiário: Márcia Guimarães da Silva
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Jossimara Polettini ; Ramkumar Menon
• Bolsa(s) vinculada(s): 24/17377-4 - Modelo Vaginal Cervical Decidual Fetal-Maternal Interface Organ-on-Chip (VCD-FMi-OOC) para análise da ascensão do core patológico da vaginose bacteriana à interface materno-fetal durante o tratamento com Metronidazol., BP.PD
• Assunto(s): Resposta inflamatória
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Disbioses vaginais | Organ-on-chip | Resposta inflamatória | Infecção do trato genital inferior e gestação

Resumo

Introdução: A partir dos estudos genômicos, foi possível identificar que a microbiota vaginal pode apresentar variações no período gestacional e evoluir para as clássicas disbioses. A relação da vaginose bacteriana com o parto pré-termo reside na capacidade de diferentes espécies bacterianas em ascender à cavidade amniótica e suscitar resposta inflamatória na interface materno-fetal. Embora o parto pré-termo espontâneo tenha etiologia multifatorial e a infecção da cavidade amniótica estar bem estabelecida, existe complexidade nesse cenário polimicrobiano, bem como na resposta induzida pelas interações. Objetivo: O objetivo primário desse estudo é caracterizar a dinâmica do tráfego de espécies bacterianas pertencentes ao core patológico da vaginose bacteriana ao longo do trato genital feminino e nos tecidos gestacionais, analisando a resposta inflamatória compartimental em modelo de organ-on-chip (OOC). Secundariamente, a partir de exossomos isolados de cultura de células vaginais previamente estinuladas por cenário polibacteriano, este estudo tem por objetivo caracterizar e quantificar a dinâmica do tráfego de exossomos ao longo do trato genital feminino e da interface materno-fetal, analisando o perfil inflamatório compartimentalizado em modelo de OOC. Metodologia: Empregar-se-à os dispositivos de OOC integrando as regiões da vagina, cérvice, decídua (VCD-OOC) e membranas corioamnióticas (FMi-OOC) como modelo para estudos da infecção polibacteriana da cavidade amniótica. Para garantir os parâmetros de integridade morfológica e fisiológica das células nos dispositivos VCD-OOC e FMi-OOC, será realizada análise dos efeitos da infecção nas camadas celulares por microscopia, para observação da capacidade migratória das células, assim como análises de apoptose e necrose por fluorescência. A senescência celular será verificada por ensaio colorimétrico de ²-galactosidade. As células epiteliais vaginais serão desafiadas com as principais espécies bacterianas identificadas no core patológico da vaginose bacteriana. Amostras sem estímulo bacteriano serão usadas como controle negativo e como controle positivo será utilizado o lipopolissacarídeo. A contagem bacteriana em cada compartimento será feita por citometria de fluxo. Para a avaliação da regulação de produção das citocinas, serão coletados e armazenados a -80ºC os sobrenadantes obtidos nas diversas camadas celulares. Os sobrenadantes obtidos das culturas serão avaliados pela tecnologia Luminex utilizando o painel para IL-1², IL- 6, sIL-6R, sgp130, mIL-6R, gp130, IL-8, IL-10, IL-13, TNF-±, GM-CSF, TLR-2 e PTX3. Para avaliar HBD1, HBD2, HBD3, TLR-4, TLR-6 e TLR-8 será feita quantificação por PCR em tempo real. Exossomos advindos de células do epitélio vaginal cultivadas em cenário polibacteriano serão isolados e marcados por fluorescência (DiO), adicionados na câmara externa do VCD-OOC e seu trafégo entre as câmaras será avaliado por microscopia. Os dados obtidos serão submetidos à análise estatística e para a escolha dos testes de comparação entre as variáveis será considerado os pressupostos determinados pelos resultados, características e comportamentos das variáveis de estudo. Para todos os testes utilizados será adotado o nível de significância de 5%. (AU)