Análise do efeito da expressão controlada de Hsf1p sobre a função de variantes da proteína humana NAGLU, envolvidas na síndrome de Sanfilippo.

• Processo: 23/14056-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2026
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: José Ribamar dos Santos Ferreira Júnior
• Beneficiário: José Ribamar dos Santos Ferreira Júnior
• Instituição Sede: Escola de Artes, Ciências e Humanidades (EACH). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Michelina Iacovino
• Bolsa(s) vinculada(s): 24/19423-3 - Análise do efeito da expressão controlada de Hsf1p sobre a função de variantes da proteína humana NAGLU, envolvidas na síndrome de Sanfilippo, BP.DR
• Assunto(s): Saccharomyces cerevisiae Doenças raras
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Hsf1p | mucopolisacaridose | Naglu | Saccharomyces cerevisiae | Sindrome de Sanfilippo | Doenças raras

Resumo

Mucopolissacaridoses (MPSs) são uma subclasse de doenças lisossomais causadas por deficiência em enzimas que catabolizam glicosaminoglicanos; carboidratos cujo acúmulo nos lisossomos causa alterações esqueléticas, cardiopulmonares, auditivas e neurocognitivas. A MPS de tratamento mais difícil é a que envolve comprometimento cognitivo grave, a síndrome de Sanfilippo, ou MPS tipo III. Nesta doença ocorre acúmulo de heparan-sulfato nos lisossomos, organelas importantes para o desenvolvimento e homeostase dos neurônios. No presente projeto, propõe-se estudar mutações que afetam a função da a-N-acetilglicosaminidase (NAGLU, MPS IIIB), a qual contribui com cerca de 30% dos casos de Síndrome de Sanfilippo. Pretende-se construir o primeiro modelo experimental para estudar esta doença na levedura Saccharomyces cerevisiae, a fim de realizar estudos funcionais da proteína NAGLU e suas variantes, que apresentam problemas de enovelamento. Para se determinar a localização celular de NAGLU, esta proteína será fusionada à cauda fluorescente vermelha mScarletI; a atividade enzimática será medida diretamente no extrato de celular, em ensaio na presença do substrato fluorogênico 4-metilumbeliferil-N-acetil-a-glicosaminídeo; a estabilidade protéica, mensurada por interrupção da tradução com cicloheximida e rastreio da proteína com Western blot. O fator de transcrição Hsf1p de S. cerevisiae ativa a expressão de várias proteínas envolvidas em reenovelamento proteico. Será estudado se há um nível de expressão de Hsf1p capaz de resolver o problema do enovelamento dos mutantes de NAGLU. Se bem-sucedida, esta prova de conceito indicará que a modulação da expressão da proteína HSF1 humana poderá tornar-se um tratamento potencial da síndrome de Sanfilippo. (AU)