Desenvolvimento de ensaios baseados em células tipo multiplex para detecção de autoanticorpos e biomarcadores em doenças reumáticas autoimunes: Esclerose Sistêmica e Miosite Necrosante Imunomediada.

• Processo: 23/17946-6
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2027
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Cristiane Kayser
• Beneficiário: Cristiane Kayser
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Gerson Dierley Keppeke
• Assunto(s): Autoanticorpos Biomarcadores Escleroderma sistêmico Reumatologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Autoanticorpos | biomarcadores | Esclerose sistêmica | miopatias inflamatórias | Reumatologia

Resumo

Introdução: A esclerose sistêmica (ES) e as miopatias autoimunes sistêmicas (MAS) são doenças reumáticas autoimunes raras cujo diagnóstico pode ser um desafio. A presença de autoanticorpos (AAbs) séricos são características das alterações imunológicas das doenças reumáticas autoimunes e tem papel importante para o diagnóstico da ES e MAS. Na ES, cerca de 10 AAbs mais comuns são encontrados, e mais de 95% dos pacientes apresentam pelo menos um anticorpo no soro. Adicionalmente a presença de determinados AAbs correlaciona-se com o subtipo clínico e prognóstico da doença, sendo a detecção essencial para classificação de risco e direcionamento do tratamento. Entre os pacientes com MAS, cerca de 20 a 30% são classificados como miosite necrosante imunomediada (MNIM), sendo que dois autoanticorpos são considerados biomarcadores e altamente específicos da MNIM: o anti-HMGCR e anti-SRP. Esses AAbs parecem contribuir para a patogênese da doença, sendo essencial a sua detecção para diagnóstico das MNIM. Recentemente, desenvolvemos um novo Ensaio Baseado em Células (CBA) para detecção do AAb relacionado à ES contra a fibrilarina, com uma estratégia inovadora. O gene da fibrilarina foi fundido a um sinal transmembrana (STM) e, em seguida, expresso transgenicamente em células HEp-2, realocando-se para a membrana celular de maneira semelhante a um receptor. A célula foi então usada como substrato em um ensaio de imunofluorescência indireta (IFA). A coloração das células que expressam STM-fibrilarina indica a presença do anticorpo anti-fibrilarina na respectiva amostra.Objetivos: Neste estudo, pretendemos desenvolver ensaios CBA multiplex para detecção de autoanticorpos associados à ES, incluindo RNA-polimerase-III, topoisomerase-I, Ku, Nor-90, PM-Scl-75/100, Fibrilarina e Th/To e os autoanticorpos HMGCR e SRP associados à MNIM. Material e métodos: Fundiremos o STM a autoantígenos relacionados à ES (RNAP-III, Topo-I, Ku, Nor-90, PM-Scl-75/100, Fibrilarina e Th/To) e ao HMGCR e SRP e desenvolveremos os CBA multiplex capazes de detectar simultaneamente os AAbs relacionados à ES e à MNIM. Para validação dos ensaios, serão coletadas e analisadas 100 amostras de pacientes com MAS e 150 amostras de ES nos respectivos CBAs multiplex. Para avaliação do desempenho do teste, o mesmo será comparado com ensaios comerciais disponíveis. Adicionalmente, os resultados obtidos serão comparados com variáveis demográficas e clínicas dos pacientes incluídos.Resultados esperados: Esperamos desenvolver ensaios com sensibilidade aprimorada, custos reduzidos e protocolos de execução simples, em comparação com os ensaios comerciais de fase sólida atualmente aplicados para detectar esses AAbs. (AU)