Triagem de ligantes enzimáticos usando plataformas integradas de ensaio

• Processo: 24/18688-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2028
• Área do conhecimento: Ciências Exatas e da Terra - Química - Química Orgânica
• Pesquisador responsável: Carmen Lúcia Cardoso
• Beneficiário: Carmen Lúcia Cardoso
• Instituição Sede: Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Ana Maria Soares Pereira ; Anelize Bauermeister ; Claudio Viegas Junior ; Dulce Helena Siqueira Silva ; Maria Fátima das Graças Fernandes da Silva ; Taisa Magnani Dinamarco
• Assunto(s): Imobilização de enzimas Produtos naturais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: As-Ms | Cromatografia de bioafinidade | imobilização de enzimas | inibidores seletivos | pesca de ligantes | triagem de ligantes | Produtos Naturais

Resumo

Um dos desafios na identificação de novos compostos bioativos é o grande número de candidatos seja de origem natural ou sintética. O uso de técnicas rápidas e eficientes de separação e de triagem na identificação de molécula ativas oriundas de extratos naturais e coleções combinatórias é crescente e estimula o desenvolvimento e aplicação de plataformas integradas de triagem que utilizem métodos on-line e off-line, que facilitem e reduzam o tempo empregado na identificação de moléculas ativas. Nesse contexto a seleção por afinidade e espectrometria de massa (AS-MS) tem alcançado relevância sobre as técnicas convencionais de High-throughput screening (HTS). Essa técnica se baseia nas interações por afinidade entre ligante-alvo biológico, separando os ligantes dos não ligantes. Os ligantes fortes são analisados por MS, reduzindo o número de candidatos a serem testados em ensaios de inibição. Essa estratégia é especialmente interessante para amostras complexas como extratos naturais. A proposta desse projeto é associar os ensaios de afinidade (AS-MS) na abordagem de pesca de ligantes ou "ligand fishing", com os ensaios de triagem da atividade biológica criando uma plataforma de ensaios. Os ensaios de triagem de atividade on-flow podem acoplar técnicas de separação cromatográfica com os ensaios biológicos. O IMER do inglês immobilized enzymes reactors pode ser utilizado em diferentes configurações: i) Diretamente ligados ao detector; ii) Antes da coluna analítica (1D), sendo o produto da reação enzimática separado e quantificado na coluna analítica (2D); ou iii) incluído após a separação realizada na coluna analítica (1D) e assim, detectar a atividade biológica diretamente no eluente do LC (2D). Pelo uso da MS além da informação sobre atividade catalítica é possível caracterizar quimicamente o(s) composto(s) biologicamente ativos on-line, reduzindo tempo e trabalho. Essa plataforma pode ser aplicada a diferentes alvos enzimáticos. Entre os alvos de interesse destacam-se as enzimas colinesterases; Acetilcolinesterase AChE humana (AChEhu) e do percevejo marrom Euschistus heros (AChEhe), buscando inibidores seletivos, a butirilcolinesterase recombinante humana (BChEhu) e as monoaminaoxidases A e B (MAO-A e MAO-B) na busca por inibidores multialvos. Outros alvos podem ser incluídos no decorrer do projeto. (AU)