Resumo
O câncer de ovário (CO) representa a malignidade ginecológica mais letal com altas taxas de recorrência e progressão, e grande parte das pacientes desenvolvem quimioresistência. O microambiente tumoral das neoplasias é composto por populações heterogêneas de células e o desenvolvimento do tumor é favorecido por um subconjunto de células especializadas, caracterizadas pelas propriedades de auto-renovação e multipotência, designadas como células-tronco cancerosas (CTC). As CTC podem se originar de células-tronco mesenquimais (CTM), tais como as derivadas de tecido adiposo humano (CTM-TAh), que estão sujeitas a diferenciação maligna para CTC ou fibroblastos associados ao câncer (FACs) a partir de fatores secretados pelas células cancerosas, principalmente através das pequenas vesículas extracelulares chamadas exossomos, que resulta em uma forma mais agressiva e quimioresistente de CO. Recentemente tem sido mostrado que a melatonina, um hormônio secretado pela glândula pineal de maneira circadiana e também por outras células de maneira não-circadiana, pode atuar como uma terapia antitumoral devido as suas funções pró-oxidantes, imunomodulatórias, antiangiogênicas e pró-apoptóticas, suprimindo a atividade de FACs e CTC. Além disso, o uso do meio de cultura condicionado (MC) e dos exossomos de CTM-TAh tratadas com Paclitaxel (PTX) já se mostrou efetivo na inibição de células cancerosas em estudos in vitro e in vivo de diferentes tumores. O presente estudo investigará o potencial da melatonina na diferenciação neoplásica de CTM-TAh mediada por células cancerosas de ovário (SKOV-3 e OVCAR-3) e a utilização terapêutica de CTM-TAh tratadas com melatonina e seus exossomos derivados na progressão tumoral. Para isso, serão conduzidos estudos in vitro com diferentes metodologias que permitirão inicialmente observar o efeito do MC proveniente de cada linhagem celular sobre a outra, acompanhado ou não dos tratamentos com diferentes concentrações de melatonina e PTX, avaliados em sistema de cultivo independente ou co-cultura indireta. A seguir, as células de CO serão semeadas em um sistema de cultivo não aderente para avaliação da formação e tratamento dos esferoides tumorais multicelulares (ETM) com CTM-TAh tratadas com melatonina e PTX ou seu MC derivado. Por fim, as CTM-TAh serão tratadas com melatonina ou PTX, seu MC será obtido e os exossomos isolados serão administrados em ensaio de drug-delivery in vivo utilizando camundongos BALB/c-nude induzidos ao CO. Serão ainda avaliados a viabilidade celular, citotoxicidade, migração, invasão e apoptose, além de ensaios para imunomarcação e quantificação proteica de marcadores para diferenciação em CTC e FACs de cada linhagem celular frente aos tratamentos específicos. Adiante serão quantificadas proteínas-alvo no MC das culturas celulares por ensaio multiplex. A melatonina e seus precursores serão quantificados e identificados por immunogold no interior das células. Os exossomos serão submetidos à microscopia eletrônica de transmissão (MET) para caracterização ultraestrutural, análise de NTA, seguido da análise de seu conteúdo por espectrometria de massas para perfil proteômico, metabolômico e transcriptômico. Com essas análises, pretende-se qualificar as propriedades terapêuticas da melatonina sobre as células de CO e sua capacidade adjuvante com as CTM-TAh em contribuir para elucidar o entendimento acerca do papel das CTM-TAh sobre a inibição ou progressão do carcinoma ovariano. Ao final, o estudo visa estabelecer uma metodologia de tratamento drug-delivery com a associação de CTM-TAh e melatonina que seja útil na inibição do desenvolvimento tumoral. (AU)
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