Desenvolvimento e Caracterização de uma Proteína Quimérica Recombinante com Atividade Anticoagulante e Antiplaquetária

• Processo: 25/04421-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2028
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Geraldo Santana Magalhães
• Beneficiário: Geraldo Santana Magalhães
• Instituição Sede: Instituto Butantan. São Paulo , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Eliana Faquim de Lima Mauro
• Assunto(s): Bactérias Clonagem Expressão de proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: anticoagluante | antiplaquetário | bacteria | clonagem | Expressão de proteínas | plasmídio | clonagem e expressão de proteinas recombinantes

Resumo

A trombose arterial e venosa é um dos principais desafios na medicina cardiovascular, sendo responsável por uma alta taxa de morbidade e mortalidade globalmente. Atualmente, a principal estratégia terapêutica envolve a combinação de anticoagulantes e antiplaquetários, o que, embora eficaz, está associado a um aumento significativo do risco de sangramento. Neste contexto, biomoléculas naturais, como inibidores do tipo Kunitz e disintegrinas, têm despertado interesse por sua alta seletividade e eficácia na modulação da hemostasia. Este projeto propõe o desenvolvimento e caracterização de uma proteína híbrida recombinante que combina um inibidor do fator Xa isolado da glândula salivar do inseto Simulium pertinax, com a Echistatina, uma potente disintegrina da serpente Echis carinatus capaz de antagonizar a integrina ¿IIb¿3, prevenindo a agregação plaquetária. A fusão destas duas moléculas será denominada de SpKunEch e visa integrar, em uma única proteína funcional, mecanismos de inibição do fator Xa e bloqueio da ativação plaquetária, reduzindo a necessidade de coadministração de fármacos e minimizando complicações hemorrágicas. Para validar sua funcionalidade, a SpKunEch será clonada, expressa em Escherichia coli, purificada e caracterizada estruturalmente por espectrometria de massas e dicroísmo circular. Ensaios in vitro serão conduzidos para avaliar sua capacidade anticoagulante e antiplaquetária por meio de testes de tempo de coagulação, inibição de serinoproteases, agregação plaquetária e citometria de fluxo. A eficácia terapêutica será investigada in vivo utilizando o modelo de tempo de sangramento em camundongos, além da análise de parâmetros hemostáticos por tromboelastometria (ROTEM). Além disto, iremos produzir anticorpos monoclonais neutralizantes, permitindo reversão seletiva dos efeitos da SpKunEch em casos de eventos hemorrágicos excessivos, o que representa uma vantagem sobre alguns fármacos antitrombóticos convencionais que carecem de inibidores específicos. Dessa forma, este estudo pretende estabelecer uma nova plataforma biotecnológica para o desenvolvimento de agentes antitrombóticos inovadores, com potencial translacional para aplicação clínica e viabilidade de patenteamento. Se bem-sucedida, a SpKunEch poderá representar uma alternativa terapêutica promissora, oferecendo um controle mais seguro e balanceado da hemostasia, contribuindo para o avanço da medicina cardiovascular e da engenharia de proteínas recombinantes aplicadas à saúde. (AU)