Investigacao da interacao entre brotopstoxina-i ( bthtx-i) e membranas artificiais por mapeamento de superficie atraves de mutagenese sitio dirigida de triptofanos.

• Processo: 02/04367-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2003
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2005
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Richard John Ward
• Beneficiário: Richard John Ward
• Instituição Sede: Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Fosfolipases A2
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Fosfolipase A2 | Mutagenese Sitio Dirigida

Resumo

As fosfolipases A2 (PLA2) são enzimas que catalisam a hidrólise Ca2+-dependente dos fosfolipídeos, liberando ácidos graxos e lisofosfolipídeos. A bothropstoxina I (BthTx-I) é uma PLA2-Lis49 isolada do veneno de Bothrops jararacussu que apresenta uma substituição do aminoácido ácido aspártico por lisina na posição 49 do sítio ativo. Esta substituição impede a ligação do cofator Ca2+, com a conseqüente perda do ciclo catalítico produtivo. Embora sem atividade catalítica fosfolipásica, a interação da PLA2-Lis49 com lipossomos provoca uma liberação rápida do conteúdo aquoso por um mecanismo independente do Ca2+. Utilizando-se a técnica de mutagênese sitio-dirigida pretende-se produzir uma série de proteínas recombinantes com triptofanos únicos em diferentes regiões da molécula. A fluorescência intrínseca dos triptofanos será utilizada para avaliar o modelo proposto através do estudo das mudanças conformacionais da proteína tanto em solução como guando em associação com membranas artificiais. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

CHIOATO‚ L.; WARD‚ R.J.. Mapping structural determinants of biological activities in snake venom phospholipases A2 by sequence analysis and site directed mutagenesis. Toxicon, v. 42, n. 8, p. 869-883, 2003. (01/07537-2, 02/04367-1, 01/00279-8)