Investigacao da interacao entre brotopstoxina-i ( bthtx-i) e membranas artificiais por mapeamento de superficie atraves de mutagenese sitio dirigida de triptofanos.

Resumo

As fosfolipases A2 (PLA2) são enzimas que catalisam a hidrólise Ca2+-dependente dos fosfolipídeos, liberando ácidos graxos e lisofosfolipídeos. A bothropstoxina I (BthTx-I) é uma PLA2-Lis49 isolada do veneno de Bothrops jararacussu que apresenta uma substituição do aminoácido ácido aspártico por lisina na posição 49 do sítio ativo. Esta substituição impede a ligação do cofator Ca2+, com a conseqüente perda do ciclo catalítico produtivo. Embora sem atividade catalítica fosfolipásica, a interação da PLA2-Lis49 com lipossomos provoca uma liberação rápida do conteúdo aquoso por um mecanismo independente do Ca2+. Utilizando-se a técnica de mutagênese sitio-dirigida pretende-se produzir uma série de proteínas recombinantes com triptofanos únicos em diferentes regiões da molécula. A fluorescência intrínseca dos triptofanos será utilizada para avaliar o modelo proposto através do estudo das mudanças conformacionais da proteína tanto em solução como guando em associação com membranas artificiais. (AU)