ESTUDO DA ESTRUTURA SECUNDARIA DA PROTEINA RECOMBINANTE COILINA POR DICROISMO CIRCULAR E DO EFEITO DA INIBICAO DE SUA SINTESE PELA INTERFERENCIA POR siRNA IN VITRO.

• Processo: 03/08122-6
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2004
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2006
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Neusa Pereira da Silva
• Beneficiário: Neusa Pereira da Silva
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Dicroísmo circular Proteínas recombinantes RNA interferente pequeno
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cajal Body | Dicroismo Circular | Proteina Recombinante | Sirna

Resumo

A proteína coilina constitui um marcador do Cajal body, um corpo nuclear cuja função ainda não está completamente esclarecida. Trabalhos recentes indicam sua participação na maturação de pequenos RNAs nucleares e nucleolares (snRNA e snoRNA). A proteína coilina é fundamental para a formação do Cajal body, não apresenta semelhança com proteínas já descritas e não há informações sobre sua estrutura. Nosso objetivo é, portanto, expressar e purificar a coilina recombinante a partir de seu cDNA completo, gentilmente cedido pelo Dr. E.K.L. Chan (Shands Cancer Center & UF Autoimmune Disease Center, FL, USA), para estudo de sua estrutura secundária por dicroismo circular. Paralelamente pretendemos estudar o efeito do bloqueio da síntese de coilina por meio de siRNA (small interfering RNA) sobre as proteínas nucleolares, fibrilarina, RNA polimerase I, NOR-90/hUBF, To e PM/Scl, em linhagem celular mantida em cultivo continuo, empregando imunofluorescência indireta dupla e microscopia confocal para análise e documentação dos resultados. (AU)