Analise de elementos de transcricao de genes de paracoccidioides brasiliensis.

• Processo: 04/09156-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2004
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2007
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Rosana Puccia
• Beneficiário: Rosana Puccia
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Paracoccidioides brasiliensis Elementos de transição
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Elementos De Transicao | Paracoccidioides Brasiliensis | Pbgp43 | Pblon | Pbmdj1 | Promotor

Resumo

O estudo de elementos trancricionais envolvidos na regulação da expressão de genes é restrito em fungos dimórficos e inexistente em Paracoccidioides brasiliensis. Nosso laboratório caracterizou 3 genes desse fungo, a saber PbGP43, PbLON e PbMDJ1, que codificam proteínas potencialmente interessantes na relação parasita-hospedeiro. A gp43 é um antígeno com características imunomodulatórias e de fator de virulência, cuja regulação trancricional foi sugerida com nossos dados experimentais. A proteinase mitocondrial Lon tem relação funcional com a chaperonina Mdj 1 em outros organismos, e em P. brasiliensis seus genes são vizinhos, compartilham a região promotora e são superexpressados em resposta ao choque térmico. PbMDJ1 é preferencialmente expresso na fase de levedura. Um elemento de transcrição do PbGP43 foi localizado em projeto anterior através de EMSA. O presente projeto tem como principal objetivo mapear elementos de transcrição da região promotora do PbGP43 e PbLON/PbMDJ1 de 2 isolados geneticamente distintos, utilizando "DNAse I fingerprint" seguido de EMSA. Um desses isolados apresenta maior polimorfismo no PbGP43 e sua região promotora, e nele a expressão do gene é diminuída com o aumento de temperatura. O projeto propõe ainda a padronização de protocolos de transformação do P. brasiliensis de forma que no futuro os elementos mapeados possam ser estudados quanto à funcionalidade no fungo usando construções com genes repórter. Alternativamente, os experimentos da expressão de genes repórter poderão ser feitos em outros fungos dimórficos. Pretende-se adicionalmente estudar a expressão de PbMDJ1 e PbLON em isolados fúngicos distintos e caracterizar a região intergência 5' completa do PbGP43. (AU)