Caracterizacao funcional e estrutural de uma metaloprotease nao-hemorragica com atividades antitumoral e microbicida isolada do veneno de bothrops pirajai.

• Processo: 07/01718-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2009
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: José Roberto Giglio
• Beneficiário: José Roberto Giglio
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Proteínas Venenos de serpentes Biologia estrutural Antineoplásicos Bothrops pirajai
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: atividade antitumoral | atividade microbicida | Biologia Estrutural | Bothrops pirajai | Metaloprotease Não-Hemorrágica | venenos de serpentes | Proteínas

Resumo

As metaloproteases de venenos de serpentes compreendem um grupo de enzimas dependentes de zinco de massa molecular variável (classificadas de PI a PIV), que são responsáveis pelo efeito hemorrágico induzido pelas serpentes Viperinae e Crotalinae. Este projeto propõe a caracterização bioquímica, molecular e estrutural de uma metaloprotease de baixo peso molecular (classe PI) do veneno de Bothrops pirajai, assim como a caracterização funcional (atividades enzimáticas, tóxicas e farmacológicas). Esta protease será isolada por cromatografia de troca iônica seguida por interação hidrofóbica, e após a verificação de seu grau de pureza por SDS-PAGE e HPLC, será utilizada para caracterização bioquímica (pI, peso molecular, conteúdo de íons divalentes, e composição em aminoácidos) e funcional. A seqüência completa da metaloprotease será determinada pelo seqüenciamento direto da proteína, permitindo uma abordagem estrutural mais elaborada através de estudos de modelagem molecular. As atividades enzimáticas serão avaliadas sobre diferentes substratos (caseína, fibrina, fibrinogênio, e colágeno), com variações de concentrações de enzima, pH, temperatura, íons divalentes, agentes quelantes e tempo de incubação. Esta protease também será testada quanto aos efeitos tóxicos (miotoxicidade sobre os músculos gastrocnemius direito, citotoxicidade sobre células endoteliais e tumorais, hemorragia, e letalidade) e farmacológicos (coagulante, anticoagulante, efeito sobre plaquetas, atividade microbicida, atividade antitumoral e indução de edema). Os estudos serão complementados com ensaios imunoquímicos, abrangendo produção e purificação de anticorpos policlonais, testes de imunorreatividade cruzada e neutralização de atividades tóxicas e farmacológicas. Os aspectos abordados neste trabalho poderão trazer informações complementares sobre mecanismos de ação, relacionando estrutura e função, podendo resultar no melhor entendimento dos efeitos induzidos pelas metaloproteases de venenos de serpentes e da participação, direta ou sinérgica, destas proteínas nos envenenamentos causados pela serpente Bothrops pirajai. (AU)