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Caracterização funcional e estrutural de uma metaloprotease não-hemorrágica com atividades antitumoral e microbicida isolada do veneno de Bothrops pirajai

Processo: 07/08361-1
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Vigência (Início): 01 de julho de 2008
Vigência (Término): 30 de junho de 2012
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
Pesquisador responsável:Suely Vilela
Beneficiário:Carolina Petri Bernardes
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:05/54855-0 - Toxinas animais: estrutura, função e aplicações biotecnológicas, AP.TEM
Assunto(s):Proteínas   Bothrops pirajai   Metaloproteases   Venenos de serpentes   Bothrops   Imunoquímica

Resumo

As metaloproteases de venenos de serpentes compreendem um grupo de enzimas dependentes de zinco de massa molecular variável (classificadas de PI a PIV), que são responsáveis pelo efeito hemorrágico induzido pelas serpentes Viperinae e Crotalinae. Este projeto propõe a caracterização bioquímica, molecular e estrutural de uma metaloprotease de baixo peso molecular (classe PI) do veneno de Bothrops pirajai, assim como a sua caracterização funcional (atividades enzimáticas, tóxicas e farmacológicas). Esta protease será isolada por cromatografia de troca iônica seguida por interação hidrofóbica, e após a verificação de seu grau de pureza por SDS-PAGE e HPLC, será utilizada para caracterização bioquímica (pI, peso molecular, conteúdo de íons divalentes, e composição em aminoácidos) e funcional. A sequência completa da metaloprotease será determinada pelo sequenciamento direto da proteína, permitindo uma abordagem estrutural mais elaborada através de estudos de modelagem molecular e cristalografia de raio x. As atividades enzimáticas serão avaliadas sobre diferentes substratos (caseína, fibrina, fibrinogênio e colágeno), com variações de concentrações de enzima, pH, temperatura, íons divalentes, agentes quelantes e tempo de incubação. Esta protease também será testada quanto aos efeitos tóxicos (miotoxicidade sobre os músculos gastrocnemius direito, citotoxicidade sobre células endoteliais e tumorais, hemorragia, e letalidade) e farmacológicos (coagulante, anticoagulante, efeito sobre plaquetas, atividades microbicida, antitumoral e indução de edema). Os estudos serão complementados com ensaios imunoquímicos, abrangendo produção e purificação de anticorpos policlonais, testes de imunorreatividade cruzada e neutralização de atividades tóxicas e farmacológicas. Os aspectos abordados neste trabalho poderão trazer informações complementares sobre os mecanismos de ação, relacionando estrutura e função, podendo resultar no melhor entendimento dos efeitos induzidos pelas metaloproteases de venenos de serpentes e da participação, direta ou sinérgica, desta proteína no envenenamento causado pela serpente Bothrops pirajai. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
BERNARDES, CAROLINA P.; MENALDO, DANILO L.; MAMEDE, CARLA C. N.; ZOCCAL, KARINA F.; CINTRA, ADELIA C. O.; FACCIOLI, LUCIA H.; STANZIOLA, LEONILDA; DE OLIVEIRA, FABIO; SAMPAIO, SUELY V. Evaluation of the local inflammatory events induced by BpirMP, a metalloproteinase from Bothrops pirajai venom. Molecular Immunology, v. 68, n. 2, B, p. 456-464, 2015. Citações Web of Science: 9.

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