Efeito do agente quelante, do ion metalico, da temperatura e do sistema tamponante na adsorcao de pro-insulina humana recombinante em imac.

• Processo: 07/55205-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2009
• Área do conhecimento: Engenharias - Engenharia Química - Processos Industriais de Engenharia Química
• Pesquisador responsável: Sonia Maria Alves Bueno
• Beneficiário: Sonia Maria Alves Bueno
• Instituição Sede: Faculdade de Engenharia Química (FEQ). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Purificação
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Purificacao

Resumo

A pesquisa na área de purificação de proteínas recombinantes, particularmente de processos que empregam a técnica de cromatografia de afinidade com íons metálicos imobilizados (IMAC), tem demandado muita atenção nas últimas décadas, pela necessidade de entendimento de seus mecanismos e desenvolvimento de novos processos. Este projeto de pesquisa visa investigar o efeito do agente quelante, do íon metálico, do sistema tamponante e da temperatura no comportamento da adsorção de pró-insulina humana recombinante e sua interação com o quelato metálico imobilizado. Para este estudo, a pró-insulina humana recombinante será utilizada como modelo, devido ao fato de possuir baixa massa molecular e cauda de poli(histidina) acoplada. Serão determinados dados de adsorção no equilíbrio com pró-insulina pré-purificada a várias temperaturas, que são requeridos para o entendimento do tipo de interação entre o quelato metálico e a pró-insulina. Modelos de isotermas de adsorção tais como Langmuir, Langmuir-Freundlich, Langmuir multicamada e Temkin serão usados para descrever os dados de adsorção no equilíbrio. Parâmetros dos modelos de isotermas tais como capacidade máxima do adsorvente e constante de dissociação do complexo ligante-pró-insulina são importantes para a ampliação de escala do processo. Parâmetros termodinâmicos de adsorção (ΔG°, ΔH° e ΔS°) serão calculados para elucidar a natureza das interações entre pró-insulina e o quelato metálico em função das variáveis estudadas. A seletividade e a capacidade dos adsorventes estudados serão investigadas utilizando lisado de células clarificado, proveniente da linha de processamento de insulina humana recombinante, doado pela empresa BIOMM (Belo Horizonte, MG). (AU)