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Construção e avaliação do micobacteriófago D29 com expressão da proteína verde fluorescente para detecção rápida de bacilos da tuberculose pulmonar

Processo: 08/05076-7
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de setembro de 2008 - 28 de fevereiro de 2011
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
Pesquisador responsável:Mario Hiroyuki Hirata
Beneficiário:Mario Hiroyuki Hirata
Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Biologia molecular  Técnicas e procedimentos de laboratório  Bacteriófagos  Expressão gênica  Proteínas de fluorescência verde  Mycobacterium tuberculosis 

Resumo

A tuberculose é hoje considerada como um dos maiores desafios a serem superados pelo homem. O uso indiscriminado de antibióticos levou ao surgimento de cepas multirresistentes de Mycobacterium tuberculosis o que, por sua vez, tem tornado difícil o tratamento da doença. Neste contexto, o estudo de novos fármacos e o desenvolvimento de métodos rápidos de identificação com baixo custo tornaram-se fundamentais no combate à doença. Este projeto tem como objetivo inserir o gene que codifica a proteína verde fluorescente (gfp) com promotor da acetamidase por clonagem sitio dirigida no DNA domicobacteriófago lítico D29 e utilizar o vírus recombinante na identificação de Mycobacterium spp. em amostras de escarro. Para tanto, técnicas de purificação do bacteriófago, extração de DNA, clonagem sitio dirigida e PCR serão utilizadas. A emissão de luz da proteína gfp, pós excitação, produzida pela bactéria infectada, será analisada em fluorímetro determinando a presença de micobactérias viáveis na amostra. Avaliar-se-á a sensibilidade, reprodutibilidade e o tempo mínimo de detecção. Espera-se que o tempo de identificação do microrganismo seja reduzido, bem como os custos do ensaio. (AU)