Construção e avaliação do micobacteriófago D29 com expressão da proteína verde fluorescente para detecção rápida de bacilos da tuberculose pulmonar

• Processo: 08/05076-7
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2008
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2011
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Mario Hiroyuki Hirata
• Beneficiário: Mario Hiroyuki Hirata
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Município da Instituição Sede: São Paulo
• Assunto(s): Biologia molecular Bacteriófagos Expressão gênica Proteínas de fluorescência verde Mycobacterium tuberculosis
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bacteriófagos | Diagnóstico laboratorial | Mycobacterium tuberculosis | Biologia Molecular

Resumo

A tuberculose é hoje considerada como um dos maiores desafios a serem superados pelo homem. O uso indiscriminado de antibióticos levou ao surgimento de cepas multirresistentes de Mycobacterium tuberculosis o que, por sua vez, tem tornado difícil o tratamento da doença. Neste contexto, o estudo de novos fármacos e o desenvolvimento de métodos rápidos de identificação com baixo custo tornaram-se fundamentais no combate à doença. Este projeto tem como objetivo inserir o gene que codifica a proteína verde fluorescente (gfp) com promotor da acetamidase por clonagem sitio dirigida no DNA domicobacteriófago lítico D29 e utilizar o vírus recombinante na identificação de Mycobacterium spp. em amostras de escarro. Para tanto, técnicas de purificação do bacteriófago, extração de DNA, clonagem sitio dirigida e PCR serão utilizadas. A emissão de luz da proteína gfp, pós excitação, produzida pela bactéria infectada, será analisada em fluorímetro determinando a presença de micobactérias viáveis na amostra. Avaliar-se-á a sensibilidade, reprodutibilidade e o tempo mínimo de detecção. Espera-se que o tempo de identificação do microrganismo seja reduzido, bem como os custos do ensaio. (AU)