Efeitos do acth e do peptídeo n-pomc na expressão de genes e proteínas relacionados com a proliferaçao e morte celular do córtex da supra-renal de ratos.

• Processo: 09/01337-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2009
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2012
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Claudimara Ferini Pacicco Lotfi
• Beneficiário: Claudimara Ferini Pacicco Lotfi
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Município da Instituição Sede: São Paulo
• Assunto(s): Hormônios Proliferação Adrenal Ciclinas Ciclo celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: adrenal | Ciclinas | ciclo celular | hormônios | proliferação | Ciclo celular e proliferação

Resumo

Trabalhos anteriores do nosso laboratório mostraram que o ACTH (hormônio adrenocorticotrópico) estimula o aumento no número de células que incorporam bromodioxiuridina (BrdU) nas zonas mais internas do córtex de adrenais de ratos hipofisectomizados ou tratados com dexametasona (DEX) (Torres & Lotfi, 2007; Baccaro et al, 2007). Resultados mais recentes também mostram que o ACTH reverte o efeito da hipofisectomia, que é de atrofia do córtex adrenal, diminuindo o número de células em apoptose (Torres & Lotfi, em preparação). Essas respostas ao ACTH sugerem o envolvimento da expressão dos genes relacionados com a progressão do ciclo celular e, portanto envolvidos com o equilíbrio entre os fenômenos de proliferação e morte celular. No entanto, as informações sobre quais são esses genes e como é sua expressão in vivo é incipiente. Nesse projeto temos como hipótese que marcadores de ciclo celular, como as ciclinas e outros ainda não conhecidos, precisam ser modulados para que as células adrenocorticais, que compõem as diferentes zonas da supra-renal, progridam de G1 para a fase S do ciclo celular quando estimuladas pelo ACTH e/ou pelo peptídeo N-terminal da POMC, esse último um provável mitogênico da supra-renal. Portanto, para testar essa hipótese e entendermos qual o mecanismo pelo qual ocorre a transição G1-S do ciclo celular nas diferentes zonas da supra-renal de rato, analisaremos a expressão diferencial dos genes relacionados com essa fase do ciclo celular através 1- de ensaios de microarray de membrana, composta por genes relacionados à proliferação e morte celular através da utilização de extratos nucléicos da glândula e de extratos de culturas primárias de células do córtex adrenal; e 2- da análise da expressão das proteínas ciclinas, de seus estimuladores e inibidores (Cdks e CKIs). A análise da expressão das proteínas será realizada através de ensaios de Western blotting ou imunoprecipitação utilizando lisados protéicos de frações das glândulas de supra-renal de ratos tratados com DEX, ACTH1-39 e o peptídeo sintético N-POMC 1-28. Além disso, a expressão das ciclinas e seus inibidores serão também estudados através: 3- de análises de imunohistoquímica para a imunolocalização das células nas diferentes zonas que compõem o córtex da supra-renal de animais tratados. O entendimento dos mecanismos envolvidos no controle do ciclo celular por fatores hormonais e peptídicos pode contribuir para o entendimento do controle molecular da proliferação e morte celular de células normais de supra-renal, e como conseqüência de tumores da supra-renal. (AU)