Efeitos dos acidos graxos sobre a producao e sinalizacao de ceramidas e fosfatidilnositol (3,4,5) trifosfato em linfocitos humanos.

• Processo: 09/50929-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2011
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia Geral
• Pesquisador responsável: Rui Curi
• Beneficiário: Rui Curi
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Ácidos graxos Proliferação Sinalização Linfócitos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Acidos Graxos | Fosfatidilinositol | Linfocitos | Proliferacao | Proteinase Quinase C | Sinalizacao

Resumo

A ativação de linfócitos exerce papel importante em muitas patologias, principalmente em doenças auto-imunes e inflamatórias. A IL-2 é a principal citocina envolvida na ativação, proliferação e sobrevivência destas células. Os ácidos graxos (AGs) também podem atuar como moléculas biologicamente ativas na regulação de várias funções de linfócitos. Neste projeto, estudaremos o efeito dos ácidos graxos na geração de fosfatidilinositol (3, 4, 5) trifosfato e ceramidas e o possível envolvimento destes segundos mensageiros na regulação da ativação de proteínas relacionadas com a proliferação celular. Os AGs estudados serão: o saturado palmítico (16:0) (PA) e o monoinsaturado oléico (18:1, n-9) (OA) que são os mais abundantes na circulação; o poliinsaturado n-6 linoléico (18:2) (LA), que é o principal constituinte do óleo de soja e, portanto, muito abundante na dieta, e os ácidos graxos poliinsaturados n-3 eicosapentaenóico (20:5, n-3) (EPA) e docosaexaenóico (22:6, n-3) (DHA), os principais constituintes dos óleos de peixe que têm enorme aplicação terapêutica. Inicialmente, os linfócitos humanos serão tratados com 50 mM de PA, DHA e EPA e 25 mM de OA e LA na presença e ausência de IL-2. Nestas concentrações, PA, EPA e DHA diminuem a capacidade proliferativa dos linfócitos humanos induzida pela IL-2. Já OA e LA exacerbam a proliferação induzida por esta citocina. Inicialmente avaliaremos os efeitos dos ácidos graxos na presença dos inibidores da fosfatidilinositol 3 quinase (PI3K), wortmanina e Ly 294002, ou na presença do inibidor da síntese de ceramida Fumonisina B2 sobre a proliferação celular, fosforilação das proteínas JAK 1 e 3, STAT 5, ERK 1/2, Akt e PKC-z, atividade da PKC-z e ativação de NF-KB. Avaliaremos o efeito dos ácidos graxos sobre a síntese de ceramidas por HPLC e sobre a formação de fosfatidilinositol (3,4,5) trifosfato pelo método de HPLC de troca iônica. Posteriormente, realizaremos um "knock out" in vitro (RNA de interferência) da esfingosina quinase 1, responsável pela síntese de esfingosina 1-fosfato que está relacionada com proliferação e sobrevivência celular, para avaliar o envolvimento do metabolismo de esfingolipídios nos efeitos dos ácidos graxos em linfócitos. (AU)